译者的话

前言

参编者

推荐的背景读物

第1章 蛋白质纯化和定性的策略

1.1 单元 蛋白质纯化和定性概述

目标和研究对象

蛋白质纯化的原料

蛋白质的检测和分析

蛋白质分离和纯化方法

蛋白质产物的定性

蛋白质纯化实验室

1.2 单元 蛋白质纯化流程图

可溶性重组蛋白

不可溶性重组蛋白

可溶性非重组蛋白

膜相关的和不可溶性重组蛋白

第2章 计算分析

2.1 单元 用于蛋白质序列分析的疏水分布图

方法学

应用

结论

2.2 单元 蛋白质二级结构预测

二级结构预测的方法

二级结构预测方法的应用

2.3 单元 使用BLAST程序家族进行序列相似性搜索

进入BLAST程序和文档

BLAST介绍

BLAST程序

2.4 单元 因特网上的蛋白质数据库

蛋白质结构数据库

蛋白质家族数据库

2.5 单元 蛋白质三级结构预测

同源性建模

序列分布图法

线程法

从头结构预测

2.6 单元 蛋白质三级结构建模

词汇

进入SwissModel程序和文档

ExPDB数据库

创建首次法建模查询的格式

观看SwissModel结果

2.7 单元 比较蛋白质结构预测

比较建模的步骤

第3章 检测和分析方法

3.1 单元 分光光度法确定蛋白质浓度

基本方案1 计算一个蛋白质的摩尔吸收系数

基本方案2 折叠蛋白质摩尔吸收系数的测定

基本方案3 使用摩尔吸收系数通过吸收光谱测定蛋白质的浓度

基本方案4 通过205nm处的吸收光谱测定蛋白质的浓度

基本方案5 粗蛋白质提取液总蛋白质浓度的测定

3.2 单元 定量氨基酸分析

样品制备

平均组成的计算

3.3 单元 肽和蛋白质的体外放射标记

基本方案1 使用碘珠对酪氨酸或组氨酸残基进行碘化

备择方案1 用氯胺T或Iodogen在酪氨酸或组氨酸残基碘化

备择方案2 使用乳酸过氧化物酶在酪氨酸或组氨酸残基碘化

辅助方案1 等摩尔碘化以获得产物的高收率

辅助方案2 用HPLC从碘化产物中分离未标记的肽

基本方案2 用Bolton-Hunter试剂在赖氨酸残基或N端碘化

基本方案3 通过酸酐乙酰化在赖氨酸残基或N端进行14C或3H标记

备择方案3 通过还原性烷基化在赖氨酸残基或N端进行14C或3H标记

备择方案4 用碘乙酸或碘乙酰胺在赖氨酸残基进行14C或3H标记

基本方案4 在肽合成过程中引入标记的氨基酸残基

备择方案5 在肽合成过程中在N端进行选择性标记

3.4 单元 总蛋白质的分析

基本方案1 总蛋白质定量的双缩脲分析

基本方案2 总蛋白质定量的Hartree-Lowry分析

基本方案3 总蛋白质定量的二喹啉甲酸(BCA)分析

基本方案4 总蛋白质定量的酸消化——茚三酮法

辅助方案1 热封玻璃管

基本方案5 测量总蛋白质的考马斯染料结合分析(Bradford分析)

辅助方案2 蛋白质样品的凝胶透析

……

第4章 提取、稳定和浓缩

第5章 重组蛋白的生产

第6章 重组蛋白的纯化

第7章 重组蛋白的定性

第8章 常规层析分离

第9章 亲和层析

第10章 电泳

第11章 化学分析

第12章 翻译后修饰：糖基化

第13章 翻译后修饰：磷酸化和磷酸酶

第14章 翻译后修饰：特定的应用

第15章 蛋白质的化学修饰

第16章 质谱

第17章 肽的制备和处理

第18章 蛋白质互相作用的鉴定

第19章 蛋白质相互作用的定量

第20章 肽酶

第21章 基于凝胶的蛋白质组分析

附录1 试剂和溶液

附录2 常用的度量制和数据

附录3 常用技术

附录4 试剂和设备供货商

参考文献

索引