引论：我们为您整理了13篇爱国标语范文，供您借鉴以丰富您的创作。它们是您写作时的宝贵资源，期望它们能够激发您的创作灵感，让您的文章更具深度。
篇1
3、天佑中华，泽被九州；福临华夏，永耀千古。
4、葆品格先进 当时代先锋
5、昔日士民心心振国途 今朝我辈言行扬国魂
6、五湖四海 青春激扬梦想 九州八方 共青团结爱国
7、高擎五四爱国旗帜 勇担强国发展重任
8、借五四之名缅先烈， 以青春之实立雄志； 融爱国之情洒热血， 担责任之重行道远。
9、五星赤帜凝鲜血 四化蓝图赖俊才
10、坚贞立志，永葆精神，奋勇当先，不负青春。
11、志存九天，心系华夏 起航，为国争光
12、奋斗中闪耀青春足迹，发展中再铸青春辉煌
13、纳四海灵气 扬改革春风 铸祖国辉煌
篇2
4、舍身为国：为国家牺牲自己的生命；
5、杀身报国：不惜牺牲生命来报答国家；
6、以身殉国：忠于自己的国家而献出生命；
篇3
历届爱眼日活动主题：
1996年6月6日首届全国爱眼日主题为“保护儿童和青少年视力”
1997年6月6日第二届全国爱眼日主题为“老年人眼保健”
1998年6月6日第三届全国爱眼日主题为“预防眼外伤”
1999年6月6日第四届全国爱眼日主题为“保护老年人视力， 提高生活质量”
2000年6月6日第五届全国爱眼日主题为“动员起来，让白内障盲光明”
2001年6月6日第六届全国爱眼日主题为“早期干预，减少可避免的儿童盲症”
2002年6月6日第七届全国爱眼日的主题为“关爱老年人的眼睛，享有看见的权利”
2003年6月6日第八届全国爱眼日的主题为“爱护眼睛，为消除可避免盲而努力”
2004年6月6日第九届全国爱眼日主题为“防治屈光不正及低视力，提高儿童和青少年眼保健水平”
2005年6月6日第十届全国爱眼日主题为“预防近视、珍爱光明”
2006年6月6日第十一届全国爱眼日主题为“防盲治盲，共同参与”
2007年6月6日第十二届全国爱眼日主题为“防盲进社区，关注眼健康”
2008年6月6日第十三届中国爱眼日主题为“明亮眼睛迎奥运”
2009年6月6日第十三届中国爱眼日主题为“关爱青少年眼健康”
2010年“爱眼日”活动的主题确定为“关注贫困人口眼健康，百万工程送光明”。
篇4
3、任何水晶眼镜对眼睛都有害。
4、动员社会各界力量，共同关心人们的眼睛。
5、儿童斜、弱视，切莫错过6岁以前最佳矫治年龄。
6、视力1.5不等于没有视疲劳。
7、不合格眼镜已成公害。
8、爱护眼睛，世界等你去发现。
9、孩子总眯眼，尽早去查眼。
10、迎奥运，迎残奥，我看见，我参与。
11、加强全民爱眼意识，提高民族健康素质。
12、早期干预，减少可避免的儿童盲症。
13、防盲治盲，共同参与。
14、爱护眼睛，为消除可避免盲而努力。
15、保护儿童和青少年视力。
16、预防近视，从今天开始。
17、关爱老年人的眼睛，享有看见的权。
18、防治近视，珍爱光明。
19、保护老年人视力，提高生活质量。
20、防盲进社区，关注眼健康。
21、动员起来，让白内障盲人重见光明。
22、预防青少年近视，人人有责。
篇5
4、草儿绿、花儿香，环境优美人健康!
5、四害传播多种疾病，消灭四害刻不容缓。
6、改善环境卫生，享受健康人生!
7、讲究卫生，消灭四害。
8、坚持经常性除四害工作，努力提高群众生活环境质量。
9、养成良好的卫生习惯，创造整洁的生活环境。
10、人人爱护环境卫生，个个参与环境整治!
11、全民动员，广泛深入地开展爱国卫生运动!
12、环境卫生，人人有责;美化环境，人人受益!
13、改善人居环境，建设美好家园!
14、“创卫”工作人人参与，美好环境家家受益。
15、爱护环境卫生，从我做起，从现在做起!
16、深入开展爱国卫生运动，努力提高生活环境质量!
17、健康水平要提高，讲究卫生是关键。
18、全民动手，大力开展灭鼠、灭蝇、灭蚊、灭蟑螂活动。
19、人人动手，消灭四害，保护环境，造福人民。
20、树立健康意识宣传健康知识倡导健康行为建设健康环境。
21、养成良好卫生习惯，创建整洁生活环境。
22、我诚信，水城诚信;我美丽，水城美丽。
23、携手创建卫生城市，共同洁净生活空间。
24、开展爱国卫生运动，提高人民健康水平。
25、“创卫”工作，民心工程，人人受益。
26、讲文明、讲卫生、讲科学、树新风。
27、“创卫”事关你我他，美丽普洱靠大家。
28、深入开展创卫活动，全面提升市民素质。
29、人人遵守社会公德，个个爱护公共环境。
30、清除卫生死角，减少“四害”孳生。
31、你我多一份自觉，城市多一份清洁。
32、讲卫生，爱清洁，防疾病，保健康。
33、讲文明，讲卫生，改陋习，树新风。
34、全面开展灭鼠、灭蝇、灭蚊、灭蟑螂活动。
35、人民城市人民管，管好城市为人民。
36、人人献上一份力，共创国家卫生城。
37、讲文明、树新风、除陋习，从我做起。
38、开展爱国卫生运动，提高城市品位。
39、全市人民齐动手，争创国家卫生城市。
40、您给水城一份清洁，水城送您十分温馨。
41、全民参与爱国卫生，美化环境人人受益。
42、全民动员，深入开展创建卫生城市活动。
43、整治环境、消灭四害，提高全民健康水平。
44、全面整治城市环境，共同建设美好家园。
45、全民共同努力，迎接国家卫生城市复审。
46、全市人民齐动手，消灭“四害”保健康。
47、齐抓共管 人人参与 创建国家卫生城市。
篇6
4、渐老念乡国，先归独羡君。简长《送僧南归》
5、利国家生死以，岂因祸福避趋之林则徐
6、逆胡未灭心未平，孤剑床头铿有声。陆游
7、匈奴未灭，何以家为？霍去病
8、王师北定中原日，家祭无忘告乃翁。陆游《示儿》
9、天下兴亡，匹夫有责。顾炎武
10、归来报明主，恢复旧神州。岳飞
11、宁不知倾城与倾国句子大全/。李延年《北方有佳人》
12、霸基弊不振，晋楚更张皇。柳宗元《咏三良》
13、但使龙城飞将在，不教胡马度阴山王昌龄《出塞》
14、汉臣曾此作缧囚，茹血衣毛十九秋。汪遵《咏北海》
15、浩荡离愁白日斜，吟鞭东指即天涯。落红不是无情物，化作春泥更护花。龚自珍《己亥杂诗》
16、丈夫不报国，终为愚贱人！陈恭尹
17、形胜三分国，波流万世功。潘大临《江间作四首其三》
18、只解沙场为国死，何须马革裹尸还。徐锡麟《出塞》
19、只解沙场为国死，何须马革裹尸还。徐锡麟<<出塞>>
20、相对向、斜阳凄怨。梁启超《金缕曲丁未五月归国旋复。》
21、天时地利与人和。刘过《西江月堂上谋臣尊俎》
22、忽忆周天子，驱车上玉山。李贺《马诗二十三首其三》
23、国家兴亡，匹夫有责。顾炎武
24、人生自古谁无死，留取丹心照汗青。文天祥《过零丁洋》
25、怅然孤啸，青山故国，乔木苍苔。倪瓒《人月圆伤心莫问前朝事》
26、鞠躬尽瘁，死而后已。诸葛亮
27、读书本意在元元。陆游《读书》
28、国破山河落照红。朱敦儒《减字木兰花刘郎已老》
29、野径云俱黑，江船火独明。晓看红湿处，花重锦官城。杜甫《春夜喜雨》
30、宫中羯鼓催花柳，玉奴弦索花奴手。苏轼《虢国夫人夜游图》句子大全/
31、为君既不易，为臣良独难。曹植《怨歌行》
32、待罪居东国，泣涕常流连。曹植《怨歌行》
33、几日随风北海游，回从扬子大江头。
34、位卑未敢忘忧国。－－陆游《病起书怀》
35、醉卧沙场君莫笑，古来征战几人回。王翰
36、龙虎方交争，七国并抗衡。张华《游侠篇》
37、操吴戈兮被犀甲，车错毂兮短兵接。屈原《国殇》
38、望上国，山呼鳌抃，遥爇炉香。柳永《送征衣过韶阳》
39、归凤求皇意，寥寥不复闻。杜甫《琴台》
40、长太息以掩涕兮，哀民生之多艰。
41、病骨支离纱帽宽，孤臣万里客江干。陆游《病起书怀》
42、天下兴亡，匹夫有责。
43、诗界千年靡靡风，兵魂销尽国魂空。梁启超《读陆放翁集》
44、岂余身之惮殃兮，恐皇舆之败绩。屈原
45、尚忆先朝多乐事，孝皇曾为两宫开。王守仁《元夕二首》
46、瞒人之事弗为，害人之心弗存，有益国家之事虽死弗避。吕坤
47、我自横刀向天笑，去留肝胆两昆仑。谭嗣同
48、安得广厦千万间，大庇天下寒士俱欢颜，风雨不动安如山。杜甫《茅屋为秋风所破歌》
49、拼将十万头颅血，须把乾坤力挽回。秋瑾《黄海舟中日人索句并见日俄**地图》
50、少年射虎名豪，等闲赤羽千夫膳。元好问《水龙吟从商帅国器猎于南。》
51、盛世垂统之英雄，以襟怀豁达为第一义；末世扶危救难之英雄，以心力劳苦为第一义。
52、楚国青蝇何太多，连城白璧遭谗毁。李白《鞠歌行》
53、待从头、收拾旧山河，朝天阙。岳飞
54、闲居非吾志，甘心赴国忧。曹植
55、卜宅从兹老，为农去国赊。杜甫《为农》
56、小来思报国，不是爱封侯。岑参《送人赴安西》
57、青春元不老，君知否。辛弃疾《感皇恩滁州为范倅寿》
58、位卑未敢忘忧国，事定犹须待阖棺。陆游《病起书怀》
篇7
3.上帝给了你两只手，你用它来开拓幸福;上帝给了你两只眼，你用它来审美世界;上帝给了你两只耳，你却用它来赶蚊子。开个玩笑，33爱耳日到了，愿你开心!
4.耳鬓厮磨，你就会陶醉;交头接耳，你点头称对;俯身贴耳，你差点犯罪;吹吹耳边风，你倍感欣慰。传情达意，惟“耳”是听。33爱耳日，愿你生活幸福，常闻佳音!
5.弹一曲快乐交响乐，声声入耳，带给你美的享受;唱一首幸福赞歌，悠扬婉转，送给你欢快之感;全国爱耳日，愿你爱护耳朵，聆听生活之美，倾听自然之趣!爱耳日快乐!
6.耳朵可以明辨是非;耳朵可以探听财富;耳朵可以偷听爱情;耳朵可以聆听祝福。全国爱耳日，好好爱护耳朵哦!祝耳聪目明，听遍中国好声音!多传福音哦!
7.全国爱耳节到了，愿你发扬“耳濡目染”的学习作风，天天和颜如玉“耳鬓厮磨”，相信你的才华大家都“耳闻目睹”!祝你得到的掌声和称赞“不绝于耳”!
8.有一处风景叫“苍山洱海”，有一种爱情叫“耳鬓厮磨”，有一份信任叫“耳目心腹”，有一种祝福叫“大饱耳福”。全国爱耳日，愿你“耳聪目明”有福气!
9.生活谨防脑进水，洗澡小心耳进水。穿耳其实并不美，一种刑罚乱跟随。噪音闹心更闹耳，听听音乐戴耳麦。一生一世一双耳，全心全意把它爱。3.3爱耳日，爱耳不是三两天，耳聪目明幸福全!
10.三月三日爱耳日，爱护双耳讲诀窍;烦与恼或忧与愁，耳朵一概听不到;寻快乐或追欢笑，幸福好运都收好;吉祥话或赞美词，耳朵统统来拥抱。祝友3.3爱耳开怀笑!
11.又是三月三，耳朵扇一扇，一帆风顺行，逍遥喜气沾，爱耳三月三，有耳人美满，生活快乐感，工作容易干，护耳三月三，卫生健康安，财富和你挨，金钱家里搬。三月三来到，祝朋友爱耳日快乐!
12.三月三日爱耳日，保护双耳要重视，送你爱耳小耳环，保护双耳不遗憾。所有声音来筛选，噪音立刻被吸收，美音聆听纳入耳，开心快乐笑呵呵，真爱作用无限大，甜蜜幸福耳朵聪。祝亲爱的，爱耳日快乐!
13.百花盛开的春天，耳朵能聆听芬芳，热情奔放的夏天，耳朵能聆听浪漫，硕果累累的秋天，耳朵能聆听喜悦，的雪皑皑的冬天，耳朵能聆听温暖。三月三日世界爱耳日，请爱护自己的耳朵，聆听生活的美妙!
14.风声、雨声、歌声、祝福声，声声入耳;思念、挂念、牵念、短信念，念念关心。全国爱耳日，祝福你：耳聪目明，耳听佳音，耳福满满，生活美满。
15.音量尽量放小点，耳朵才会舒服点，耳机尽量离远点，听力才会健康点，爱护耳朵多一点，倾听才会清晰点，全国爱耳日，爱护耳朵，保护听力，聆听美妙无限，听取快乐不断!
16.百鸟齐鸣，聆听美妙，心情爽爽;动人旋律，倾听优雅，心情甜甜;欢声笑语，收听快乐，心情棒棒;全国爱耳日，爱护耳朵，听取幸福欢唱，听见如意欢歌，愿爱耳日快乐!
17.烦心的话偏不听，守护内心的宁静;知心的话常说说，耳朵也会寂寞;美丽的地方常走走，让快乐伴你耳目一新。33爱耳日，让耳朵代表你的心，聆听生活的美好。
18.接收讯息的是它，倾听倾诉的它，欣赏音乐的是它，感受声音的是它。全国爱耳日，让我们爱护耳朵，爱护这世间美妙的声音与乐章。
19.送你美妙的乐曲，愿你聆听出快乐;送你动听的话语，愿你聆听出喜悦;送你温馨的呼唤，愿你聆听出亲切;送你感人的祝福，愿你聆听出真心。三月三日爱耳日，送你甜蜜的问候，请你保护好耳朵，让听力永不降低。
20.小小双耳作用大，工作生活离不了，时刻不忘保护它，日子过得才美妙。有水入耳莫慌张，棉签清洁吸干燥，嘈杂地方要少去，MP3不要听，手机接听离耳远，远离辐射耳强健。爱护耳朵保听力，3.3爱耳记心里!
21.今天是33爱耳日，请定期清除生活噪音，聆听世界天籁。奏响快乐的心曲，感受生命的律动。让幸福来拥抱，健康来垂爱。爱耳日，愿你所见所闻一切美好!
22.侧耳聆听，平淡中流淌美好;仔细体会，问候中饱含心愿;用心倾听，文字间隐藏情意。33爱耳日到了，请接受，来自耳朵的祝福。祝你健康快乐!
23.如果你长着顺风耳，预示着顺风顺水;如果你长着元宝耳，预告你财源滚滚。全国爱耳日，无论你拥有怎样的耳朵，都祝福你：耳聪目明、耳闻目睹天下幸福!
24.如果没有听力，世界是一片寂寞;如果没有听力，就如同白昼没有太阳;如果没有听力，甜言蜜语该如何诉说?全国爱耳日，好好爱护耳朵，愿你幸福无极限。
25.耳朵是我们的一大宝，丧失听力不得了。语言交流有障碍，美妙音乐听不了。平时注意保护它，避免噪音来侵扰。全国爱耳日到了，愿你保持耳健康，幸福生活乐淘淘!
26.没有听力，看电影没有对白，听歌曲没有声音，看tv只有色彩，好心情无法分享，烦恼事无法诉说!全国爱耳日，愿我们都给力爱耳!享受有声有色的世界!
27.全国爱耳日来到，爱耳护耳很重要;耳朵卫生要保持，安静环境最适宜;噪音高音要避免，冬季防冻保护好;爱耳问候不能少，爱耳知识传播好;祝福朋友耳健康，聆听幸福乐逍遥。祝全国爱耳日快乐!
篇8
4、草儿绿、花儿香，环境优美人健康!
5、四害传播多种疾病，消灭四害刻不容缓。
6、改善环境卫生，享受健康人生!
7、讲究卫生，消灭四害。
8、坚持经常性除四害工作，努力提高群众生活环境质量。
9、养成良好的卫生习惯，创造整洁的生活环境。
10、人人爱护环境卫生，个个参与环境整治!
11、全民动员，广泛深入地开展爱国卫生运动!
12、环境卫生，人人有责;美化环境，人人受益!
13、改善人居环境，建设美好家园!
14、“创卫”工作人人参与，美好环境家家受益。
15、爱护环境卫生，从我做起，从现在做起!
16、深入开展爱国卫生运动，努力提高生活环境质量!
17、健康水平要提高，讲究卫生是关键。
18、全民动手，大力开展灭鼠、灭蝇、灭蚊、灭蟑螂活动。
19、人人动手，消灭四害，保护环境，造福人民。
20、树立健康意识宣传健康知识倡导健康行为建设健康环境。
21、养成良好卫生习惯，创建整洁生活环境。
22、我诚信，水城诚信;我美丽，水城美丽。
23、携手创建卫生城市，共同洁净生活空间。
24、开展爱国卫生运动，提高人民健康水平。
25、“创卫”工作，民心工程，人人受益。
26、讲文明、讲卫生、讲科学、树新风。
27、“创卫”事关你我他，美丽普洱靠大家。
28、深入开展创卫活动，全面提升市民素质。
29、人人遵守社会公德，个个爱护公共环境。
30、清除卫生死角，减少“四害”孳生。
31、你我多一份自觉，城市多一份清洁。
32、讲卫生，爱清洁，防疾病，保健康。
33、讲文明，讲卫生，改陋习，树新风。
34、全面开展灭鼠、灭蝇、灭蚊、灭蟑螂活动。
35、人民城市人民管，管好城市为人民。
36、人人献上一份力，共创国家卫生城。
37、讲文明、树新风、除陋习，从我做起。
38、开展爱国卫生运动，提高城市品位。
39、全市人民齐动手，争创国家卫生城市。
40、您给水城一份清洁，水城送您十分温馨。
41、全民参与爱国卫生，美化环境人人受益。
42、全民动员，深入开展创建卫生城市活动。
43、整治环境、消灭四害，提高全民健康水平。
44、全面整治城市环境，共同建设美好家园。
45、全民共同努力，迎接国家卫生城市复审。
46、全市人民齐动手，消灭“四害”保健康。
47、齐抓共管 人人参与 创建国家卫生城市。
篇9
关键词：实质性阻碍；分支产业；产业损害；反倾销
中图分类号：F759
文献标识码：A
文章编号：1002-0594(2009)08-0010-05
收稿日期：2009-03―02
一、“实质性阻碍”标准的含义
“实质性损害”、“实质性损害威胁”与“实质性阻碍一国产业建立”fmateriallyretarding the establishment of an industry)是WTO《反倾销协议》和各国反倾销法中所列明的确定倾销损害存在的三条标准。在绝大多数反倾销案件中，各国反倾销当局在对进口产品提起反倾销诉讼时，适用的标准都是第一条标准，即“实质性损害”标准，适用“实质性损害威胁”标准的案件并不多见；而适用第三条标准“实质性阻碍一国产业建立”标准提起反倾销诉讼的案子更是寥寥无几。
上述三条标准的区别在于：国内产业受到“实质性损害”是指一个已经发生了的事实，一个产业受到实际的损害还是损害的现实威胁，是区别“实质性损害”和“实质性损害威胁”的根本标志。另外，受到“实质性损害”的产业必须是进口国已经建立起来的产业，也就是说，“实质性阻碍”标准不能适用于已经建立起来的产业，这种损害只能是对一个尚未建立的新产业而言。因此，一个产业是否已经建立起来，是反倾销案件中适用“实质性损害”标准还是适用“实质性阻碍”标准的基本标志。某一国家的反倾销当局如果想对尚未建立起来的产业或幼稚产业进行保护的话，只能适用反倾销法中的第三条标准，即“实质性阻碍”标准。
“实质性阻碍一国产业的建立”是指倾销产品并没有对一国有关产业造成“实质性损害”，也没有造成“实质性损害威胁”。但是，如果严重阻碍了该进口国生产同类产品的一个新产业的建立，进口国也可以将其视为征收反倾销税的条件之一。《关税与贸易总协定》第6条以及世界主要发达国家的反倾销法对于这一标准都有明确的规定：美国1930年《关税法》、欧盟反倾销法以及日本、澳大利亚、新西兰和中国的反倾销法对“实质性阻碍一国产业建立”的问题都做出了规定，但均没有给出明确的定义，也没有对判定“实质阻碍一国产业建立”需要考虑的因素做出相应的解释。一般认为，阻碍一国产业的建立不能理解为倾销产品阻碍了拟建立一个新产业的设想和计划，而是一个新产业的实际建立过程受到阻碍，并且有充分的证据加以证明。例如，某一产业已建立，设备已经购进，但由于倾销产品的大量进口，造成进口国的某一产业无法开工投产，就可以认为是“实质性阻碍”了该国某项新产业的建立，进口国就可以据此对进口产品征收反倾销税。
二、关于“实质性阻碍”标准与新产业建立的争议案
2003年9月，南非的Scaw Metals公司代表南非关税同盟的国内产业对从中国进口的铸(锻)造研磨钢球提起反倾销申诉，申诉方援引WTO《反倾销协议》中确定倾销损害存在的第三条标准，即“实质性阻碍一国产业建立”的标准，指控中国的进口产品对南非关税同盟锻造研磨介质产业的建立造成了“实质性阻碍”。2003年lO月3日，南非国际贸易委员会正式对原产地或进口来源地为中国的铸(锻)造研磨钢球产品发起反倾销调查，涉诉方为两家中国出口企业。2004年5月19日，南非国际贸易管理委员会在其第60号报告中做出初裁：认为倾销与损害均存在。此案中争议的焦点就是对“南非关税同盟新产业”的界定，对南非研磨介质产业是否为“新”产业的判定成为“实质性阻碍”的焦点问题(高虎城，2006)。这是中国出口产品自1979年以来遭遇反倾销调查的案件中，所遇到的为数不多的适用“实质性阻碍”标准所提起的反倾销诉讼案件。
本案的出口方代表，“南非国际贸易服务部门”(jnternational trade service，简称ITS)对以南非研磨介质产业的建立所造成的“实质性阻碍”作为发起调查的基础提出质疑：ITS认为，申诉方错误地认为自己有权将对产品差异性解释作为国内新产业的建立，并提请南非国际贸易管理委员会参考其在此前的4018号报告中对“相似产品”的确定。作为调查过程的一部分，南非国际贸易委员会需要确定国内产业的代表资格问题。在上述4018号文件中，南非国际贸易委员会曾指出“本案件的申请是代表国内产业而作出，并且符合反倾销协议中的发起条件”。按此说法，“国内产业”已经存在，就无需也无法论证“新”产业的建立。因此，申诉方混淆了现存产品系列范围扩大与新产业建立这两者之间的区别。
作为本案的出口商，中国五矿公司认为，申诉方在其非保密性的申请书中曾指出：为了迎合市场变化的需求，申诉方开始投资建立制造锻造钢磨介质新产业，并且于2003年1月对新的锻造钢球研磨介质工厂进行调试。但是，申诉方的该项投资并未构成南非关说同盟“新”产业的建立，因为申诉方声称在1999年就已经生产锻造钢球。申诉方仅就现在的制造程序所进行新的投资，旨在提高已在南非关税同盟进行生产的锻造、铸造钢球的产量，这并非新产业的建立。因此，申诉方所谓的“阻碍南非关税同盟研磨介质‘新’产业的建立”的说法并不成立。
而本案的申诉方代表南非德勤公司指出：正如申诉书所述，对于采用新技术生产设备进行的大量投资的确构成了南非关税同盟新产业的建立。该生产设备所生产的系列产品从前并未在南非生产或由南非关税同盟向市场提供。Scaw Metals公司从前生产的是70～120毫米系列的锻造钢球以及30～60毫米系列的铸造钢球。而南非关税同盟需要的是70～125毫米系列的铸造钢球而不是锻造钢球。在钢产业内，存在着不同的子产业或分支制造业，同样也包括了研磨介质及其分支制造业。如果遵循该种广义的对产业的理解方法，就无法保护在南非关税同盟产业的投资免受不公平贸易的影响。Scaw Metals对于新直径的锻造钢球之研磨介质生产设备的投资从前并未在南非关税同盟中建立，因此，应被视作研磨介质新分支产业的代表。至于中国五矿公司提及的在先前调查中的同类产品则认为与此案没有关联，因为上一次的评估仅仅是为了确定在那次调查中的
相似产品在锻造和铸造钢球中的比较；而本案的问题是具有该种特征的产品以前是否在南非关税同盟生产以及新的投资是否代表了“新”产业的建立。
南非国际贸易管理委员会参考有关各方申辩后，确认了其在2003年12月17日作出的决定：Scaw Metals对于新直径的锻造研磨介质制造设备的投资从前并未在南非关税同盟建立，并且可以代表研磨介质产业的分支。2004年5月19日，南非国际贸易管理委员会在第60号报告中裁定倾销成立，并根据“实质性阻碍”标准判定中国的铸(锻)造研磨钢球产品对南非关税同盟的研磨介质产业造成了损害。
虽然此案最终由于倾销与损害之间不存在因果关系而未能对中国出口产品实际征收反倾销税，但这一案件的发生却提供了中国出口产品所遭遇的600余起反倾销案件中，较为罕见的由反倾销当局适用“实质性阻碍”标准提讼的案例。此案给我们的一个重要启示就是对于“新”产业建立的界定问题：分支产业可以代表某一产业，而对于某种分支产业建立的阻碍也可以成为适用“实质性阻碍”标准的基础和前提，这对中国的反倾销现状和国情来说极为重要。一方面，即使中国的出口产品在目标进口国家里没有同类产品的生产，只要进口国家存在生产同类产品的计划或即将实施生产同类产品的方案。并对这一方案已经进行了实质性投入或进入了实质性启动阶段，中国出口商品仍有可能遭遇到以“实质性阻碍”标准提起的反倾销指控。因此，中国的出口商必须对进口国家可能适用反倾销中确定倾销损害存在的第三条标准保持警惕。同时，在我国产业对外提起反倾销调查时，在某些时候，即使进口产品没有对国内的某一产业造成损害，不能适用“实质性损害”标准或“实质性损害威胁”标准，但这一计划只要是已经进入了实质性启动阶段，哪怕是某一产业的分支产业的建立，如已经有实质性的资金投入，也可以考虑适用“实质性阻碍一国产业建立”的标准对倾销进口产品提讼。
三、“实质性阻碍”标准在各国反倾销实践中的适用
WTO1994年《反倾销协议》以及各国的反倾销法虽然在确定倾销损害的三条标准中均对“实质性阻碍”作出了规定，但至今尚未对“实质性阻碍”标准的定义做出确切的解释。在1967年举行的第六轮多边贸易谈判中达成的第一个反倾销协议，即《1967年执行总协定第六条的协定》(又称1967年守则)是对“实质性阻碍”标准作出进一步明确规定的第一次努力，在该守则的第三条“损害的决定”中，损害被确定为包括“实质性损害”、“实质性损害威胁”以及“实质性阻碍某一产业的建立”。该守则进一步规定了“建立”的含义。第3条(a)款规定；建立不一定要工厂或企业已经建立而生产还没有开始，甚至是精确的计划或者开始建立工厂，同时仅仅有要想建立一个新产业的意图是不够的――必须采取具体措施。守则列举的三个情况：处于计划筹建的高级阶段、工厂的建设或机器的订购，就表明需要投入足够的时间和资本。东京回合谈判中，为了争取美国的接受，对1967年反倾销守则又进行了进一步修改，从而制定了1979年反倾销守则，对其中的第三条做了较大的改动，虽然第三条继续被命名为“损害的确定”。但1967年守则第3条对于“建立”的详细规定被删除了。这样，美国国际贸易委员会就可以根据具体案件对新产业“实质性阻碍”的是否成立做出判定。例如，对某个已经建立但还没有投入运营的企业，在倾销产品大量涌入而造成市价大幅下跌的情况下。如果按照这种已经下跌的价格，该企业将不可能实现工厂建立前所论证的预期利润和利益，或企业投入运营将导致更大的损失等等。此种情况就可以确定该新产业的建立受到了进口产品的“实质性阻碍”。
从目前世界各国适用“实质性阻碍”标准提起反倾销申诉的实践来看，“实质性阻碍”标准适用的前提是产业尚未建立，而尚未建立的“新”产业可能存在于以下三种情况：
第一种是进口国对建立产业的计划与构想还停留在设计蓝图阶段，或者已经对某种新产业、新项目进行了一定程度的谈判、进行了一定的可行性研究等等，但还没有作出实际资本的投入，这种情况显然被排除在适用“实质性阻碍”标准的条件之外，各国反倾销当局对于类似案件也都作出了否定性裁决。
第二种情况是对新产业有计划与构想，还进行了实际资本的投入，有证据充分证明这些投入确实是为新产业建立而进行的，如设备的购进等，就可认为是存在适用“实质性阻碍”损害标准的前提。
第三种情况是新的工厂已经建立起来，但还没有正常运营，如果适用“实质性损害”的第一条标准。尚难以找到同类产品，无法确定损害的存在，这也是进口国当局采用“实质性阻碍”标准而非“实质性损害”标准的一种选择。
究竟在产业开始生产达到怎样程度才可以适用“实质性阻碍”标准?美国国际贸易委员会通常的检验包括下列因素：(1)生产是从何时开始的；(2)生产是稳定进行还是开开停停；(3)与整个国内市场相比，国内生产的规模；(4)美国产业是否已达到一个合理的“平衡点”；(5)生产活动是否真的形成了一个新产业或仅仅是一家现有企业的一个新产品系列。
在加拿大一桩著名的鳕鱼反倾销案中，美国国际贸易委员会曾对这个概念做出过解释：(1)适用“实质性阻碍”标准，不仅限于还没有投产的产业，还包括那些已经开始生产但还没有稳定经营的新工厂；(2)因为试图确定一项产业是唯一的，是否对新建产业有实质性阻碍，应根据具体案件决定；(3)对还没有开始生产的产业，须有充分证据表明该产业的投产已有相当约束。从美国以往的反倾销实践来看，在Jeannette玻璃一案中，由于美国生产商没有获得价值25000美元的监测设备，因而被认为还没有为生产进行实质性投入，美国国际贸易委员会作出终裁：实质性阻碍不成立。在美国审理日本渔网倾销案中，美国国际贸易委员会第一次作出了“实质性阻碍国内产业建立”的肯定性裁决。由于美国生产商已经为开发一种具有可商销性的晶体渔网进行了大量的投资，国际贸易委员会认为，如果对日本渔网不征收反倾销税，可能会对美国此类产业的新建造成实质性阻碍，因此，国际贸易委员会最终作出了肯定性裁决(孔祥俊，2003)。
在欧盟反日本艇外推进机倾销案中，欧盟企业控告从日本低价进口的85马力以上的艇外推进机阻碍了欧盟相同产业的建立，但欧盟委员会经审查后认为，欧盟尚未生产这类产品，也没有充足的事实表明欧盟正在计划生产这类产品，欧盟委员会最终裁决不存在实质性阻碍。由此看来，欧盟关于“实质性阻碍”的一般立场是只有在欧盟产业出于“计划筹建高级阶段”的情况下，才可能裁定构成“实质性阻碍”，而要证明这一点，必须提供相关已有的厂房、资金技术等令人信服的证据，主要考虑以下三个方面：证据确凿，新产业应在建设中，至少计划已经开始实施。
加拿大国际贸易法庭对一起反倾销案件审理中
也曾涉及到对“实质性阻碍”标准的认定。法庭认为，虽然企业与生产同类产品的另一企业进行过生产项目磋商，进行中的项目也是真实、严肃的，但还不具有明确许诺的性质。而确定和明确许诺的性质才可成为认定实质性阻碍的必要因素。这就是所谓的“实质性承诺”或“实质性开始状态”。对一个正在进行可行性研究，但还没有实质性投入的项目，比如说尚无资金投入的项目，不能看作是“实质性承诺”，也不应成为判定实质性阻碍的充分条件。另外，一个生产某种新产品的工厂加入某一产业的情形不能作为实质性阻碍的申诉理由，因为新工厂加入情形中的产业通常认为已经建立，不能适用这一标准。
中国出口产品在美国也曾遭到类似的质疑：1991年1月，美国制钨公司向美国商务部和美国国际贸易委员会申请对进口自中国的钨精矿砂进行反倾销调查。在美国商务部裁定中国出口到美国的钨精矿砂倾销幅度为151％之后，还确定国内产业受到了损害，美国国际贸易委员会尚需确定该种损害是否为本案中的中国进口产品所造成的(马秀红，2003)。本案中，美国制钨公司也曾提出了由中国进口的钨精矿砂阻碍了美国钨精矿砂产业的建立。通常，国际贸易委员会都是先决定国内产业是否“已经建立”，如果该产业还“未建立”，国际贸易委员会将决定进口产品的倾销是否阻碍了建立该产业的进程。而如果证实国内产业“已经建立”了，则“实质性阻碍”标准就不能再适用该案。国际贸易委员会将集中考虑是否存在对国内产业的“实质性损害”或“实质性损害威胁”。最后，美国国际贸易委员会认为生产钨精矿的产业已经持续了很长一段时间，而且该产业的经营是稳固的。因此，国际贸易委员会判断美国国内钨精矿产业已经建立。事实上，当被问及该产业状况时，申请人也表示该产业已经建立。鉴于此，美国国际贸易委员会决定适用“实质性损害”或“实质性损害威胁”标准来判断国内产业的损害是否存在，从而放弃了适用“实质性阻碍”标准的初衷。
四、“实质性阻碍”标准的借鉴意义
实际上，正因为某项未建立或已在建设中的产业概念比较模糊，要确定对这类产业的“实质性阻碍”存在诸多困难。各国反倾销实践中很少使用“实质性阻碍”这一标准。但随着国际贸易竞争的日益激烈，研究“实质性阻碍”标准对我国现阶段的对外贸易实践具有重要的现实意义。
一方面，我国的具体国情决定了目前我国国内仍存在着大量新兴产业和幼稚产业。例如彩色胶卷、计算机及其软件业等等，有些产业甚至还在拟建或刚刚兴建之中，这都很可能成为外国产品对我国的新兴市场进行大量倾销并对我国新产业的建立造成“实质性阻碍”情况的发生：另一方面，我国是钢铁产品的进出口大国。子产业是否可以作为一个新建产业作为适用“实质性阻碍”标准提起反倾销诉讼的理由对我国来说具有重要的参照意义。自1997年中国首次对加拿大、韩国和美国的进口新闻纸提起反倾销调查至今。中国已对国外进口倾销产品提起反倾销调查达40余起，有效地保护了相关的国内产业。在我国2001年新修订的《反倾销条例》第7条中规定：“损害，是指倾销对已建立的国内产业造成实质损害或者产生实质损害威胁，或者对建立国内产业造成实质阻碍。”尽管迄今为止，中国在对倾销进口产品的反倾销中，尚未适用过上述的第三条标准。但是，可以预测，在中国从贸易大国向贸易强国不断迈进的道路上，随着中国与其贸易伙伴间的贸易摩擦的不断加剧。中国反倾销有关部门援引上述条款的日子也许就在不远的将来，因此，研究与借鉴欧美等国家关于实质性阻碍的相关案例很有必要。
新兴工业化国家韩国的反倾销制度的一个特点就是经常使用“实质性阻碍”标准，与美国和欧盟等国相比，韩国使用的频率是相当高的。如1990年对美、日、聚酸树脂反倾销案，1993年对美、日、台玻璃纤维反倾销案，1992年对泰国滚珠轴承反倾销案等均是以“实质性阻碍”国内产业的建立为理由而采取反倾销措施的。
我国反倾销立法中关于“实质性阻碍”标准的最新、最详细的规定是国家商务部2003年10月17日、11月17日实施的《反倾销产业损害调查规定》第二章第九条的规定：“确定对国内产业的实质性阻碍，除了第八条的因素外，还应审查但不限于以下因素：(一)国内产业的建立或筹建情况；(二)国内需求及其增长情况影响；(三)倾销产品对国内市场状况的影响；(四)倾销进口产品的后续生产能力和在国内市场的发展趋势。”但如何根据上述各种因素，来对某一进口产品实施反倾销制裁，在我国的对外反倾销实践中尚无首例案例。然而，虽然我国的对外反倾销实践中没有以此标准裁定倾销的损害。但在实践中却曾考虑过适用这一标准。
1998年12月8日，作为国内冷轧硅钢片产品的唯一生产者，武汉钢铁集团公司代表中国冷轧硅钢片产业正式向当时的国家外经贸部和国家经贸委提出了对原产于俄罗斯的进口冷轧硅钢片进行反倾销调查的申请。这是自1997年3月《中国人民共和国反倾销反补贴条例》颁布实施后，我国冶金行业对外所提起的第一起对外反倾销案。申请人武汉钢铁公司指出，自1996年以来，俄罗斯连续三年向中国大量低价倾销冷轧硅钢片，在进口数量不断递增的同时，出口价格更是不断降低。并且从中国国内冷轧硅钢片产业的产销率、市场份额、产能比、开工率、价格、利润率、就业情况、mAm资等各项指标来看，从1996年以来。已连续三年使中国的相关国内产业遭受“实质性损害”，我国有关当局最后以“实质性损害”标准对这一案例作出了确定性的倾销损害存在的裁定。但在这一案例中，国内申请人还同时提出：武钢扩建后的冷轧硅钢片厂很可能从竣工之日起就要面临停产、半停产状态，俄罗斯产品的倾销行为同时也对中国的类似产业构成了“实质性阻碍”。但至于申诉是否能够得到支持的关键也同样取决于新扩建的冷轧硅钢片生产设施所生产的产品是否可构成冷轧硅钢片的新产品，从而决定是否可以将其视作一个新的产业(宋和平，2001)。这一案例中出现的情况与上述南非对中国的研磨钢球案有如出一辙的地方，都涉及到子产业的建立可否被认为是新产业建立的问题，如果是，则可以据此提起反倾销调查，也可以考虑依据“实质性阻碍”标准对进口产品征收反倾销税，否则，就只能考虑按“实质性损害”标准进行裁量。
值得注意的是，GATT第六条第1款仅对“实质性阻碍”产业新建做出的附带性规定中，对于“新建”的具体所指并不明确，主要分歧是在国内产业计划、筹备和启动阶段，还是指已经开始实质性的建立阶段，尚无定论。而我国《反倾销条例》中的相关规定中也仅是做出了“审查国内产业的建立或筹建情况”这样笼统的规定，虽然这种笼统的规定可以使中国的反倾销主管当局具有较大的自由裁量权，但由于缺乏可操作性的具体条款，在处理具体案例时，应诉方很可能因其不符合WTO的透明度原则而对我们的裁决依据提出异议，同时，在中国出口产品被提起反倾销调查时，也可能会出现对方滥用自由裁量权的报复行为。
(官桓刚电子邮箱：ghg@dufe.省略)
参考文献：
高虎城，2006，国外对中国产品反倾销、反补贴、保障措施案例集(亚非卷第二册)[M]，北京：商务出版社
篇10
Ruan可能是宣萱历任男友中最特殊的一个，既非圈内人士，也非豪门子弟，只是一名生活简单的宠物医院兽医，而且是个老外。人在娱乐圈的宣萱觉得找个老外自有好处：“那就不会影响到他家里人嘛，骚扰不到他家里人，因为他家人都在外国。”她坦言其实自己拍拖向来无惧公开，只是不会刻意，如果被撞到了就承认，但和很多艺人一样，她深感过去每次拍拖都不堪其扰。当初与Ruan公开恋情，宣萱说也曾事先征求他的意见，无奈香港娱乐媒体向来作风彪悍，虽然Ruan读不懂中文，但通过朋友和同事的翻译，不时仍会被某些报道稍微刺激到。宣萱说最开始他很不习惯，她只能不断重复给他做心理建设，“他都会说，啊，不是这样的喔，有没有搞错啊!我就会讲是这样的啦，你没办法的。”
外国男友固然不容易被港媒起底骚扰，但语言和文化上的差异，却让Ruan理解女友作品也颇为费劲。今年宣萱在TVB有三部剧播出，但前两部的《掌上明珠》和《施公奇案》都是古装戏，Ruan看得意兴阑珊。好在最后一部《刑警》是时装剧，他就每晚追着看，还不停向女友询问剧情，宣萱只得在旁边不断翻译给他听，回想起来甜蜜又开心，她大笑着说“翻译得自己都没法看了”。不过前不久刚拍完的清宫戏《万凰之王》，她就说这部虽然拍得辛苦，但就完全没法翻译给男友听，因为剧情和自己耍奸诈的内心戏实在太复杂。
推荐沟通方式：
无亲热戏份可来探班
经历过几段感情，宣萱觉得无论和圈中人还是圈外人拍拖各有利弊，但注重沟通很关键。现任男友Ruan的工作环境很简单，每天就是对着生了病的猫猫狗狗，所以最初他无法理解女友的工作，尤其剧集拍起来没日没夜、不能回家睡觉、不能接电话的状况，令他觉得太不人道。不过两人在一起的时候，正好是宣萱接拍《刑警》的时候，宣萱不时带上男友一起去拍戏，让他了解现场工作环境，这也是让他对自己增强信心的方法：“如果我不让他来看一次，那他就没有一个picture在脑子里了，究竟她是做什么的？为什么她会工作到这么晚？”而Ruan探班之行中不仅吃了定心丸，也认识了宣萱的同事，长得不错的他更被苗侨伟称为“贝克汉姆”。他似乎也喜欢上女友这份多姿多彩的职业，但宣萱说如果他愿意做特约临时演员，还可以试一试，拍戏就绝对不会让他去。聊到此处她不仅连说了几个“不会”，还笑称“他对着小动物我比较有信心”。而她自己也有一个让男友有信心的办法，就是有亲热戏的时候不能让他探班，普通的逛逛沙滩、喝茶聊天的戏他就可以来。
终成剩女的拍拖心态：
曾为事业放弃感情，如今放松享受恋爱
入行以来，前面的十多年一直在马不停蹄地拍戏，40岁的宣萱近年开始减产，一年只拍两套剧集。她现在更在意的是生活，忙家事，忙拍拖。她说过去虽然有拍拖，但一拍起戏来就几乎撇下男朋友，“如果你投资多点时间拍戏，那拍拖的时间自然没了。因为明白事业上现在有机会摆在你面前，如果不珍惜这个机会未必会重新回来。”在作为演员的黄金时期，她曾经就事业和男友的无法并重而问过自己，如果现在放弃（事业），你将来会不会后悔？“那我答得很快，就是‘会’！我告诉自己，那就不要再考虑了。”
但如今面对早前的TVB视后之争，她的心态已经无比放松，那些游戏规则已经与她无关。而每年两部剧集，她也可以等自己喜欢的好剧本才拍。但闲下来以后，对于结婚生子她却尚未有计划，和男友这一刹享受的是拍拖。狮子座的她说自己只有面对男友才会表现出小女人的一面，这段姐弟恋互补又融洽：“（遇事）他会问我意见，他会信任我多点，另外一方面他个性很淡定，事情的分析我会问他，会尊重他。”至于怕不怕当高龄产妇，她就觉得要随缘也要慎重，“不可以说硬要的，不是说因为想要宝宝就马上结婚了，那样是会有问题的。”
1993年，与张卫健合作电视剧《龙兄鼠弟》时种下情缘，但恋情维持两年便和平分手。
1996年，与荣文瀚一见钟情继而拍拖。但到2002年，两人感情突然转淡，荣文瀚刻意与宣萱疏远，女方极力挽回感情，最终以分手收场。
篇11
Key words: Aiduo VCD；private enterprises；market competition
中图分类号：F270 文献标识码：A 文章编号：1006-4311（2012）20-0148-02
1 胡志标的企业家精神，为“爱多”开启成功之门
企业家精神对于企业的成功至关重要，这一点对爱多来说也不例外。可以说，如果没有胡志标富于“冒险”、“创新”、“执着”的企业家精神，就不会有“爱多”曾经的辉煌。从4000元创办第一家变压器工厂，到生产游戏机、学习机被小霸王误“打假”，到听说VCD机并雷厉风行地组织开发和80万成立中山爱多，再到一掷千金夺取央视两届广告“标王”等，无不体现出胡志标勇于冒险的精神，而冒险的背后是对市场机遇的把握与渴望成功的追求，正是这种精神力量成就了企业领导者勇于拼搏、执着进取的韧劲，也构成了企业不断前进的源动力。至于“创新”精神，在胡志标身上更是体现得淋漓尽致，国内第一个采用“悬念广告”、电子行业第一家获取“ISO9000认证”、以张艺谋和成龙的强大阵容投放广告等，一系列令业界眼花缭乱的创新举措背后，无不体现着胡志标特有的商业头脑与敏锐的商业嗅觉，这是个人天赋与后天习得的共同产物。可以说，“爱多”的成功，从很大程度上要归功于胡志标的企业家精神。
启示：为何现如今中国民营企业普遍面临着企业“传承”问题？为何创业一代企业家明着是“放手”于二代，暗着却仍旧“大权在握”？为何二代传承人带领企业再创辉煌佳绩的事例少之又少？为何二代传承人运营企业的能力总是遭到“质疑”？本文认为，并不是因为二代传承人的企业管理知识匮乏，相反他们大都接受过远高于一代企业家的综合系统的管理知识学习；也不是因为他们所掌握的资源不够丰富，实际上一代企业家已经为其打下了坚实的资源基础。那么原因究竟何在呢？对企业家精神的认知也许会为我们给出部分答案。
2 多项管理创新举措出奇制胜，迅速占领市场竞争主导地位
创新是企业核心竞争力已成为不争的事实。许多观点认为是胡志标在营销方面的天赋成就了爱多曾经的辉煌，本文并不这样认为。企业发展遵循的是“木桶原理”，任何“一招鲜式”的奇招只能赢得短暂的利益，而连续“奇招”奏效的背后，往往是一个系统商业模式的支撑。爱多的创新型商业模式，主要包含了财务融资、市场营销和生产模式三大方面的创新。首先，凭借国内首创的“悬念营销”四两拨千金，在区域市场迅速站稳脚跟；随后抓住VCD市场的迅速崛起以及爱多VCD过硬的质量和品牌知名度，在民营企业融资渠道不畅的情况下，采取无偿占用上下游合作伙伴资金的方式，快速融资以支持企业规模的扩大和广告营销的投入；接着，大手笔夺取央视广告标王，采用当时效果最佳的品牌传播媒介——央视广告进行集中式“轰炸”，一举取得品牌知名度和市场占有率的大幅提升；在此过程中，爱多生产组织方式基本上采取的是轻资产的“半虚拟化经营模式”，依靠广东当地成熟的VCD生产制造配套环境，通过多数零部件生产外包进行产业链整合，一方面减轻了自身资金投入的压力，另一方面生产组织灵活快速，能够与快速上升的市场需求进行匹配。可以说，爱多的系统性商业模式的创新为爱多的快速成长奠定了坚实的基础。
篇12
【Keywords】 ovarian cancer; hypoxia; reoxygenation; CD147; CLSM
【摘要】 目的：探讨缺氧再氧合过程中CD147基因在卵巢癌细胞系中的表达. 方法：卵巢癌细胞系3AO，HO8910PM分别在混合气体缺氧仓中缺氧30 min后更换新鲜培养液，给予再氧合， 常氧下继续培养0，4，8 h. 激光共聚焦显微镜定位，定量检测CD147的表达. 结果：CD147定位于细胞质. 急性缺氧30 min后两种卵巢癌细胞系中CD147表达量明显高于对照组，再氧合4，8 h时CD147的表达量明显降低. 两种细胞株均表现为再氧合4 h时CD147的表达与对照相比无明显差异（P>0.05），再氧合8 h时降为最低. 结论：缺氧上调卵巢癌细胞系中CD147的表达，再氧合可使高表达回降.
【关键词】 卵巢肿瘤； CD147； 缺氧； 再氧合； 激光共聚焦显微镜
0引言
CD147属免疫超家族成员，与肿瘤浸润转移相关. 我们先前的研究［1］表明CD147在卵巢癌组织中有不同程度表达，它与卵巢癌的浸润转移有密切关系［2］，但其作用机制尚未明了. 缺氧是实体肿瘤普遍存在的特征［3］，CD147的3′末端有两个缺氧反应元件结合位点，可能与缺氧有关. 我们探讨缺氧参与卵巢肿瘤CD147表达的调控如下.
1材料和方法
1.1材料
CD147 mAb由第四军医大学细胞工程中心提供. FITC由本校电镜中心提供. 卵巢癌细胞系3AO，HO8910PM由本实验室提供. 混合气体缺氧仓由西京医院神经内科提供. Avlomni Measurement血气分析仪由西京医院ICU提供. BioRad MRC1024型激光共聚焦显微镜和软件分析系统由第四军医大学电镜中心提供. 胰蛋白酶购自北京生物技术有限公司.
1.2方法
取3AO，HO8910PM对数生长期细胞，2.5 g/L胰蛋白酶液消化制成单细胞悬液，将细胞接种到预先消毒并放置了载玻片的培养皿中，CO2孵育箱培养过夜（8 h）至细胞贴壁，贴壁细胞放入缺氧仓(950 mL/L N2， 50 mL/L CO2)中30 min致急性缺氧. 缺氧后的细胞分别再氧合4，8 h. 再氧合即更换新的细胞培养液继续在37℃，50 mL/L CO2培养箱中培养. 取对照组贴壁细胞和在混合气体培养仓中急性缺氧30 min的贴壁培养细胞瓶送血气分析. 取出盖玻片，0.01 mmol/L，pH 7.4的PBS冲洗2次，丙酮固定液固定10 min后放入盖片染色缸中，PBS振洗5 min，取出吹干，滴加1∶10 CD147 mAb 20 μL置湿盒内37℃保湿30～60 min，PBS振洗3次，5 min/次，吹干，滴加FITC羊抗小鼠IgG 20 μL，置湿盒内，37℃保湿30～60 min，PBS振洗2次，5 min/次，蒸馏水振洗1次，500 mL/L缓冲甘油封片. 激光共聚焦显微镜（CLSM）下观察并拍照，软件定量分析. 用于FITC的激发波长为488 nm，共聚焦系统由BioRad公司提供的软件控制，在Pentium90计算机中运行，显微镜聚焦旋钮由步进马达控制，用于图像采集的物镜为PlanNeofluar40×油镜. 图像存为512×512像素类型. 利用软件在镜下随机选取5个细胞，对其进行CLSM检测定量分析，读取均数和标准差.
转贴于
统计学方法：利用SPSS软件进行单因素方差分析及LSDt检验.
2结果
2.1细胞终极培养液血气分析急性缺氧后细胞培养液pH 7.16. PO2为7.4 kPa;对照组pH为7.4，PO2为17.3 kPa. 缺氧仓中pH值试纸显示pH 5～6，说明仓中真实的环境PO2远低于7.4 kPa. PO2与氧浓度(FO2)的关系：PO2＝（吸入气压力-6.27）×FO2. 当PO2=18.6 kPa时，FO2=20％；且氧分压与氧浓度成正比关系. 本实验中FO2
2.2CLSM检测CD147定位于细胞质中（Fig 1）. 3AO，HO8910PM细胞均在为急性缺氧30 min后CD147表达量较对照组明显增加，再氧合4，8 h后CD147表达量明显降低（P=0.000）. 采用LSDt进行均数多重比较，HO8910PM组在再氧合4，8 h和对照组比较均无明显差异（P>0.05），余各组两两比较均有显著统计学差异(P
3讨论
CLSM是在荧光显微镜成像的基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可见光激发荧光探针，利用计算机进行图像处理，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图，并能对抗原在细胞中的定位和定量作出精确的分析，较传统的免疫组化方法更为先进.
缺氧是肿瘤微环境的一种病理生理特征. 在实体肿瘤中， 由于肿瘤细胞增生迅速， 往往造成肿瘤局部的缺氧坏死. 同时， 缺氧作为一种应激反应还可诱导肿瘤相关显型基因表达增加，促进肿瘤的进展［4-6］. 我们先前的研究结果表明CD147在卵巢癌的发生、发展、浸润转移中起重要作用，可能是卵巢肿瘤的一个药靶分子. 本结果显示急性缺氧30 min后，卵巢癌细胞系8910PM和3AO中CD147的表达上调，而再氧合后卵巢癌细胞中CD147的表达下降，再氧合4～8 h时CD147的表达接近对照组表达量，且随着缺氧时间的延长CD147的表达逐渐降低，低于对照组. 可见缺氧所致卵巢癌细胞系中CD147的表达上调是可逆的，缺氧和再氧合可有效调控卵巢癌中CD147的表达，缺氧可能通过调控CD147的表达促进卵巢癌的发生、发展.
【参考文献】
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［2］ 杨红，郑维国，辛晓燕，等. CD147反义核酸对卵巢癌细胞生物学行为的影响［J］. 第四军医大学学报， 2002;23(18):1657-1660.
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［3］ Semenza GL. HIF1 and tumor progression: Pathophysiology and therapeutics［J］. Trends Mol Med， 2002；8: 62-67.
篇13
卵巢肿瘤是女性生殖器常见肿瘤，卵巢癌病死率居妇科恶性肿瘤之首。随着免疫组化技术在肿瘤病理诊断中的不断深入和广泛应用， 卵巢肿瘤特异性抗原或者基因的检测日趋成熟，对卵巢肿瘤的病理分型和预后的判断越来越有意义[1，2]。但是由于组织定会引起蛋白内和蛋白间的亚甲基桥的桥连，引起许多抗原决定簇被封闭，影响了免疫组化的结果。本研究通过高温高压处理法进行抗原修复、免疫组化技术检测卵巢上皮肿瘤组织中P53蛋白、CA-125，现报道如下。
1资料与方法
1.1 标本来源
卵巢癌标本93例，均来自我院2006年1月～2010年12月住院的卵巢肿瘤患者，年龄18～74岁，平均52.3岁。术前无放疗及化疗史，经术后病理证实为上皮性卵巢癌。其中浆液性腺癌47例，黏液性腺癌39例。子宫内膜样癌5例，未分化癌2例。
1.2组织来源
所有组织来源于我院病理科，经术后病理证实为卵巢上皮性恶性肿瘤。标本固定于中尔马林中，4 ℃下24h常规梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，连续切片。切片厚4μm。每例均切6张，附贴于涂有多聚-L-赖氨酸的玻片上，置60℃烤箱内烘烤。将每个病例的6张切片随机分为两组，组1为不修复组，组2为抗原修复组。
1.3抗原修复方法
组1不进行抗原修复，直接进行免疫组化染色；组2采用高温高压法进行抗原修复，市售家用压力锅，工作压力为90 kPa。石蜡切片脱蜡至水。PBS浸泡3次，每次2min。将修复液0.01mmol柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）烧开后将切片放入高压锅中，然后盖好盖子，加上气压阀，继续加热至喷汽时，即达到工作温度和工作压力，开始计时2min后压力锅离开热源，自然冷却。
1.4免疫组化染色
免疫组化Envision法染色检测P53蛋白和CA-125的表达。所使用试剂P53蛋白单克隆抗体、CA-125及Envision试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，按其使用说明书操作。用已知P53阳性的鼻咽癌切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。组1石蜡切片脱蜡至水。组2切片自然冷却后，3%H2O2室温孵育5～10 min，以消除内源性过氧化物酶的活性；蒸馏水冲洗2次，PBS浸泡3次，每次2 min；滴加一抗工作液，37 ℃孵育2 h或4 ℃过夜；PBS冲洗3次，每次2 min；滴加适当量的二抗，37 ℃孵育 0.5 h；PBS冲洗3次，每次2 min；DAB显色；自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。
1.5阳性结果
判断标准P53蛋白阳性细胞核内有棕色颗粒状物质、CA-125阳性细胞膜染成棕黄色为阳性。根据阳性细胞所占比例分为4级：0％为阴性（-），1%～10％为弱阳性（+），11%～50％为中等阳性（++），＞50%为强阳性（+++）。
1.6统计学处理
两组率的比较采用卡方检验，以P＜0.05为有统计学意义。
2结果
抗原修复后切片背景干净,显色对比鲜明，结构清晰，定位准确，易于观察；P53蛋白阳性率和CA-125阳性率均高于未修复组，详见表1。
3 讨论
免疫组化是免疫组织化学技术的简称，它是应用抗原、抗体特异性结合的原理，使用已知的抗体在病理切片上与相应的抗原结合，然后把结合产物应用组织化学的方法显现出来，使之可以在显微镜下观察得以确认；是免疫学与分子生物学技术和病理形态结合的一门新兴学科，具有操作简单、敏感性高、特异性强及将形态、代谢和机能密切结合起来等优点，已广泛用于病理诊断、鉴别诊断[3]。但经10%中尔马林固定石蜡包埋的切片，组织中的许多抗原决定簇被醛基交联封闭，以至于无法与抗体结合，从而影响染色结果。并且固定时间越长的标本，它所形成的交联就越紧密，抗原就越难以被激活，所需的修复强度也就越强。因此组织中抗原性修复技术与免疫组织化学染色的成败有十分密切的关系[4]。CA-125和P53是常用的卵巢肿瘤标志物，与肿瘤大小、病理类型、分化程度、病人的预后、术后易复发等指标密切相关[5]，因此准确进行免疫组化染色检查对临床工作意义重大。本文应用高温高压法对93例卵巢癌组织切片分别进行抗原修复，发现修复后切片背景干净,显色对比鲜明，结构清晰，定位准确，易于观察，方法稳定，结果可靠，可提高病理诊断的准确性。
1991年 “甲醛对蛋白的改建可以在高温120℃及酸碱作用下复原”，这一重要线索成功地创造了抗原修复技术，该技术被誉为“免疫组化染色的一次革命”，迅速在世界范围内推广。抗原热修复的原因和理论基础是通过加热水解被醛基交联封闭的许多抗原决定簇，使抗原决定簇被激活，其中修复的温度和时间非常重要。高压锅进行高温高压修复可以避免外界环境改变所致温度的影响，高压修复温度均一，节省时间。高压抗原修复法在染色强度和重复性等方面优于微波法[6]，是细胞核阳性的抗体。P53蛋白在细胞核表达，本文显示高温高压修复后P53在卵巢癌细胞核的表达水平提高，同时主要在细胞膜表达的CA-125的阳性率也提高了。因此针对卵巢癌P53和CA-125免疫组化染色，高压锅修复可以提高阳性表达率，染色清晰，操作简单，结果易于判断。
有报道用柠檬酸缓冲液（pH6.0）、EDTA缓冲液（pH9.0）及高压加热法,胰蛋白酶消化对CD68、lysozyme、α-AT和S-100不同的抗体进行修复，结果3种抗原修复法的免疫组化切片,胰蛋白酶修复法阳性率显著高于高压加热法与微波加热法且染色背景清晰,高压加热法与微波加热法非特异性着色较深,阳性率低[7]。抗原修复虽然可以提高免疫组化阳性率，但是修复的方法较多，包括酶修复、热修复等，不同组织类型、不同固定方法对抗原的修复应答亦有所差异，因此对不同的抗体建议选用不同的修复方法可提高表达率，提高病理诊断的准确性。
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