引论：我们为您整理了13篇春节标语范文，供您借鉴以丰富您的创作。它们是您写作时的宝贵资源，期望它们能够激发您的创作灵感，让您的文章更具深度。
篇1
3、梅为小院添春*。
4、世上今逢万里潮。
5、鹊向龙年报好音。
6、龙萦华表冲霄汉。
7、一点公心秋月明。
8、梅为春意赋新意。
9、户栽花树户生辉。
10、牢固确立科学发展观，在科学发展中率先发展。
11、人寿年丰喜事多。
12、神驹腾跃吉祥年。
13、梅花香遍神州地。
14、坚持科学执政、民主执政、依法执政，全力构建和谐社会。
15、山青水秀风光好。
16、庆佳节，创新业，夺取全市改革开放和现代化建设新胜利。
17、祝您新年快乐，身体安康，笑口常开！一元复始，旦复旦兮！
18、庆祝春节，欢度新年。
19、龙兴阳动乾坤晓。
20、春到碧桃树上。
21、满怀生意春风蔼。
22、春草满庭吐秀。
23、龙步震开盛纪春。
24、雪向龙年报丰年。
25、春满人间民泰安。
26、笛弄梅花曲。
27、华人欢度万荣春。
28、龙族喜迎千禧岁。
29、瑞雪兆丰年。()
30、莺歌绿柳楼前。
31、政协人和天地春。
32、跨越江河架宏桥。
33、东风迎新岁。
34、兔降葡旗别澳门。
35、龙游沧海江湖小。
36、龙腾云海国昌盛。
37、狮醒神州世界惊。
38、莺啼杨柳风。
39、削平山岭铺大道。
40、百花遍地飘香。
41、洞庭自有千重浪。
42、张灯结彩迎新年，齐心协力谱新篇。
43、深入贯彻落实科学发展观，实现三个文明建设协调发展。
篇2
1、广告宣传
(1)横幅：在店门口醒目位置悬挂横幅，内容为渝德居火锅 店向广大人民拜年!新年好!
(2)广告牌：放于门口位置，内容：为感谢广大顾客的大力支持，春节期间我店照常营业，凡来我店用餐者均可获赠春节吉祥物和每桌赠送喜糖一包。
2、店堂布置装饰
(1)要有生肖饰品吉祥物。
(2)要在大门上贴“福”字，可在大门两边悬挂渝德居专用冬瓜灯笼或无屑鞭炮。
(3)店堂装饰要突出热闹气氛。
3、春节菜品安排
(1)春节期间不打折，缘由：客人有钱消费、菜品进价高、员工工资高、春节吃的是一种心情;
(2)菜品要好，可安排一些高档菜、解腻菜(绿色食品、蔬菜);
(3)、小吃品种要多，可到附近超市采购一些半成品;
(4)、订做“年夜餐、团体订桌、春节套餐系列包桌”等。
4、服务质量
(1)、服务水平要高，服务质量要好，上菜速度要快;
(2)、注意服务员的节日祝福语，要简练有又新颖，要因人而异，祝福各有特点(如：您好，羊年快乐!祝您羊开盛世，羊年发“洋”财等)。
5、礼品赠送
(1)、可赠送新年生肖吉祥物(如羊年送羊娃娃);
(2)、可送喜糖包(喻意甜甜蜜蜜，圆圆满满);
(3)、可送红包，红包内装消费代餐券，红包和喜糖包可同时赠送。 第三部分 其它特殊情况促销活动
淡季营销措施 一、行销思路
1、加强员工素质、技能的培训，品德思想的灌输，增加凝聚力、向心力、亲和力。
2、开展、加强客户关系管理，走访、问候老顾客，邀请老新顾客，建立顾客档案，实行情感营销，让所有消费者通过就餐感受我们品牌魅力，认知我们的经营理念，感受到我们的真情、真诚。方式：
1)邀请部分知名顾客来店恳谈，免费就餐。
2)到客户单位进行友情慰问，发邀请卡，一句话：始终从情感上和顾客拉近距离，展开全员行销活动。
篇3
3. 五更分两年年年称心一夜连两岁岁岁如意
4. 求真务实抓转型，全心全力搞跨越!
5. 祝各位在新的一年里：身体健康，万事如意!
6. 一干二净除旧习五讲四美树新风
7. 聚精会神搞建设，一心一意谋发展
8. 喜迎猴年!欢度新年!再接再励!再创辉煌!
9. 欢天喜地迎新春，尊老爱幼促和谐!
10. 文明过新年，快乐每一天!
11. 张灯结彩迎新年，齐心协力谱新篇
12. 张灯结彩欢度佳节，齐心协力共创伟业城市，让生活更美好
13. 新年伊始，向各行各业的建设者致敬
14. 群策群力，迎难而上，推动经济社会持续健康发展!
15. 开拓创新，与时俱进，科学发展，安全发展，转型发展，跨越发展!
16. 恭祝全体员工及家属新春快乐、阖家幸福!
17. 建设社会主义新农村，共创xx美好家园
18. 坚持党的群众路线，全心全意为人民服务
19. 张灯结彩迎新年，齐心协力谱新篇!
20. 坚持科学发展和谐发展，努力把xx建设成为民富区强、文明和谐的现代化xx新城
2017年欢度春节宣传标语（简单篇）
1. 春满人间民泰安。
2. 人寿年丰喜事多。
3. 神驹腾跃吉祥年。
4. 梅花香遍神州地。
5. 坚持科学执政民主执政依法执政，全力构建和谐社会。
6. 山青水秀风光好。
7. 庆佳节，创新业，夺取全市改革开放和现代化建设新胜利。
8. 欢欢喜喜过节 平平安安过节
9. 新年伊始，向各行各业的建设者致敬
10. 过欢乐春节 文明春节 做文明市民
11. 欢度春节，祝福万家
12. 辞旧迎新 来年更上一层
13. 张灯结彩迎新年，齐心协力谱新篇。
14. 瑞雪映兆丰稔岁。
15. 牢固确立科学发展观，在科学发展中率先发展。
16. 笛弄梅花曲。
17. 华人欢度万荣春。
18. 龙族喜迎千禧岁。
19. 瑞雪兆丰年。
20. 莺歌绿柳楼前。
21. 政协人和天地春。
22. 跨越江河架宏桥。
23. 东风迎新岁。
24. 兔降葡旗别澳门。
25. 龙游沧海江湖小。
26. 文明过新年，快乐每一天!
27. 欢天喜地迎新春，尊老爱幼促和谐!
篇4
4. 抢抓新机遇，增创新优势，再创新辉煌。
5. 莺啼杨柳风。
6.春雨洒来万象新。
7. 百花遍地飘香。
8. 洞庭自有千重浪。
9. 新年新气象 来年更辉煌
10.龙萦华表冲霄汉。
11. 梅为小院添春*。
12. 世上今逢万里潮。
13. 鹊向龙年报好音。
14. 新年伊始，向各行各业的建设者致敬
15. 一点公心秋月明。
16. 梅为春意赋新意。
17. 建设文明和谐新丰谷，再创丰谷新辉煌!
18. 度盛世春节，共鉴美满春节 恭祝全体人民节日愉快，万事如意
19. 辞旧迎新 来年更上一层
20. 过欢乐春节 文明春节 做文明市民
21. 以我文明新貌，共庆新春佳节
22. 张灯结彩欢度佳节，齐心协力共创伟业
23. 张灯结彩迎新年，齐心协力谱新篇
24. 求真务实抓转型 全心全力搞跨越
25. 春草满庭吐秀。
26. 恭祝全体员工及家属新春快乐、阖家幸福!
27. xx(单位名称)祝全市人民新春快乐平安吉祥阖家幸福万事如意!
28. 庆祝春节，欢度新年。
29. 户栽花树户生辉。
30. 春到碧桃树上。
31. 满怀生意春风蔼。
32. 削平山岭铺大道。
篇5
4、久旱逢甘露，问候是及时雨。润物细无声，友谊是一串露珠。愿你在新的一年爱情甜甜，美得像蜜蜂，好运连连，多得像牛毛!
5、新春的脚步来了，幸福的大门开了，红红的脸蛋笑了，祥瑞的银羊绕了，滚滚的财气聚了，旺旺的好运到了，盈盈的丰收满了，新春佳节，愿你美梦都成真!么么哒!
6、我向上帝许了个愿：愿你年年岁岁青春在，分分秒秒人人爱;工作体面又气派，钞票伴着大风来;别墅豪宅看大海，宝猴跑车开得快。春节快乐!
7、一朵莹莹的雪花，一个甜甜的微笑，一缕轻轻的春风，一声暖暖的问候，一句美美的祝愿，一条深情的短信，猴年祝鸿福齐天!
篇6
文献标志码：A文章编号：1009－4474(2012)04－0043－05
The Cultural Symptoms and Decoding of Youth Idol Drama
——Analysis Based on the Theory of John Fiske
YAN Qing， ZHU Jing-wen
(Department of Literature and Journalism, Sichuan University, Chengdu 610064, China)
Key words: Youth Idol Drama; John Fiske; ideologies; ideograph; intertextuality; Post Modernism
Abstract: Youth Idol Drama as a type of TV play closely interacts with business and economic logic, and its artistic generation and acceptance are both deeply influenced by the post modernism thoughts. In the light of John Fisks Symbol theory, TV “bardic” ideographic theory, intertextuality theory of horizontal and vertical dimensions and so on, the creation and acceptance of the Youth Idol Drama can be interpreted as the ideology knitted with the illusion of the reality. In the dissemination, the selection of strategy for daily visual bardic is to be made through the audiences individual decoding in the acceptance and the visual spectacle and entertainment carnival of the Youth Idol Drama are thus completed.
青春偶像剧（以下简称偶像剧）是电视剧艺术中受商业逻辑和经济逻辑影响最深刻的类型，是后现代体验下生活镜像和意义建构的独特形态。偶像剧以时尚性、奇异性表征系统将受众定位于追新求异的青少年人群，并力图通过电视剧文本符码的日常化影像编织将现实的意识形态最大化呈现。费斯克用符号学原理剖析电视（节目）文本，阐释了电视用符码来建构意义，并将生产者、文本和观众三者勾连起来，实现了从意义的建构到符码表意的视像传播，再到受众的个性化解码的动态而开放的意义生态圈和循环系统，为偶像剧的传播理念、意义编织和接受等提供了新颖的视角和理论价值。
一、意识形态的编织和幻化呈现
偶像剧运用符码单位构建青少年日常生活情境的叙事文本，以电视媒介为传播载体进行一种视像化的意义传达，最终通过一系列视像化的符码表意和隐喻完成了文本意义的游移升华。费斯克在《解读电视》、《电视文化》等著作中巧妙地将索绪尔、巴特等人的符号理论融入电视媒介，创造性地将电视符码分为了“现实”、“表现”和“意识形态”三个等级。
在第一层级“现实”中，符码代表了其初始意义，亦即索绪尔符号学中的“能指”效用。偶像剧中这些符码取自现实客观世界，是受众热捧事物的择取，如青春靓丽的俊男美女、时尚多变的服饰妆容、现代化的都市建筑等。“现实”层面的电视剧符码所建构的影视文本尽管只是对现实世界的部分选择，但是在一定程度上实现了视像的真实性，满足了电视受众的日常化观赏诉求。湖南卫视自拍剧《一起来看流星雨》中的男女主角就均为戏剧学院的本科学生，没有明星光环的他们与普通的青少年受众缩短了距离，因此他们的出场就更像是校园亲历而非表演。美国偶像剧《绯闻女孩》中，现代都市风貌的符码较之中韩两国更为突出，无论是男女主角居住的豪华别墅或商务楼，还是舞会派对中豪华的厅堂装潢，抑或配合情节呈现的风景胜地，无不以摄像机为眼、电视为介来完成叙事文本符码的建构。
第二层级的“表现”是通过技术使日常符码的表意上升到文化层次——在社会共享符码的关联下形成了偶像剧的符号所指。这种通过技术形成的叙事文本可以称为技术符码，包括摄像技术的运用，如镜头写意、画面剪辑、声画效果等，可以更好地完成“现实”层面日常符码表意的提升。偶像剧中技术符码的运用主要体现为声画演绎人物性格、镜头写意躯体和类躯体镜像、画面营造都市幻象三个方面。首先，声画演绎人物性格是通过声音和画面的运用来实现符码表意的深化，将俊男美女视像化的日常符码表意提升到了无法用语言表达的内心层面。偶像剧的对白和音乐，无论是幽默风趣还是诗意唯美，都充分运用了语言内在的戏剧张力，营造轻松浪漫的氛围，积淀观影情绪，从而推动情节的发展和人物塑造。《绯闻女孩》就借用当红歌星Lady Gaga的歌曲作为影片的背景音乐，从而有效地提升了剧作的时尚性和流行度。其次，镜头写意躯体和类躯体镜像是指用镜头语言如特写或者推拉摇移等来突出剧中人物躯体和类躯体的视觉呈现，由此来建构偶像剧特有的视觉化、时尚化、都市化的青春幻象。躯体镜语是指身体包括人物神态、动作、装扮等在内的人物形象的呈现，它是以人物靓丽的容貌、完美的身材和时尚的装扮来塑造偶像的崇高地位的。再次，画面营造都市幻象则是通过画面的剪辑技巧辅以镜头语言来完成都市幻象，如酒吧、豪华餐厅、星级酒店等营造出偶像剧的背景环境，为偶像剧塑造梦幻却又高度仿真的环境现场。而韩国偶像剧《拜托小姐》中女主角居住的豪宅、休闲娱乐的高尔夫球场、办公的豪华商务大楼则成为了偶像剧的类躯体叙事，在辅助躯体叙事的同时交代环境背景，其营造的都市幻象一方面为达成受众的情感共鸣做铺垫，另一方面则通过这种高度物质化、视像化的呈现方式达到陌生化效果，为受众崇拜心理的激发划定了最佳的观赏距离。无论是躯体镜语还是类躯体镜语，在偶像剧中都成为满足受众偶像崇拜诉求的最佳话语呈现方式，也成为了建构消费景观、拟造超仿真社会的最佳路径。
第三层级的“意识形态”架构于“现实”能指与“表现”所指共同塑造的符码意指之上，是一种高于文化层面的世界观、价值观的符码表意。偶像剧的“意识形态”主要以电视文本符码的隐喻、转喻等方式体现地域文化差异，在潜移默化中形成独特的意识形态符码，有利于受众的识别进而引发共鸣。中国偶像剧在含蓄委婉的叙事文本符码、相对保守的躯体符码中充盈了进取向上的精神。比较有代表性的影片《奋斗》，没有梦幻的童话情节，但同样叙写了青年一代青春激昂的奋斗与情感历程。即使是陷入偶像剧套路的《一起来看流星雨》等剧，与相同题材的韩国版、日本版《花样少男少女》相比，也同样少了梦幻，而多了对现实生活的写照与人物成长轨迹的描绘。韩国偶像剧在躯体符码上突出的表现则从侧面烘托出韩国当下明显的消费转向痕迹，《浪漫满屋》、《加油小姐》、《咖啡王子一号店》等韩国偶像剧无一例外地都塑造了完美靓丽、时尚与智慧并存的男女主角，他们从服饰到妆容搭配都成为了潮流时尚的引领者，无不刺激着受众的消费欲望。在韩剧所营造的时尚帝国中，人们似乎必须消费才能生存。美国的偶像剧在都市环境营造上的技术优势，传达了其以现代化为诱饵的霸权文化的渗透效果。高耸云端的商务写字楼、开阔堂皇的私家别墅、豪华奢侈的购物广场……现代化都市的一切标记对于任何一个非美国人来说都很常见，而《绯闻女孩》中呈现的男女青年之间直白的乱性、物欲横流的社会风貌以及非人性的暴力冲突仍旧在不遗余力地传达一种美国式生活方式，不管这种奢靡混乱的生活方式是多么地不堪。
二、日常生活的后现代表达与传播
在费斯克看来，电视具备的“吟咏功能”(bardic function)顺利实现了叙事文本的传递。电视的吟咏功能类似于中世纪的游吟诗人的作用——“利用既有语言把当时社会的生活作息，整理组织出一套又一套的故事或讯息，并强化肯定了听者对自己以及对自己文化的感受。”〔1〕在当下后现代思潮的背景下，电视的“吟咏功能”对人们的身份认同和文化归属发挥了重要作用。所谓后现代，是一个相对于现代性的概念，但是这种概念并非在时间、序列上进行区别〔2〕。在此我们更多的是将后现代看为一种对世界的态度，一种思考和感受的方式或行为，它质疑客观真理、理性、同一性和客观性等，不信任任何单一的理论框架、大叙事或终极性解释。而电视的“吟咏功能”是在题材选择、符号修辞、传播技术等后现代认可的基础上实现传播与接受的。
在题材选择上，偶像剧通过对经典文本的“后现代摹写”锁定文化范围，奠定收视根基。作为20世纪以来的重要文化现象，偶像剧的创作深受后现代思潮的影响，在表达方式上呈现出明显的后现代倾向——在内容上对经典文本的创造性摹写与在形式上对经典文本的模仿、拼贴，借经典文本的受众基础为新的偶像剧预设收视期待。经典文本的后现代摹写，是借鉴利用经典文本中的素材，根据现代青少年群体的审美标准和创作者的传播需求来进行筛选、加工创作全新的电视剧本。改写后的偶像剧摈弃了经典文本中深刻的思想内涵，力求以通俗、浅显的方式达到最优化的定位传播。法国后现代主义代表人物里奥塔尔曾将后现代主义定义为“针对元叙事的怀疑态度”〔3〕。而偶像剧的受众被定位为一群勇于接受新思潮、敢于颠覆传统的青少年人群，该剧种的诉求本身就含有对元叙事持怀疑、颠覆以至批判的态度，因此，偶像剧在题材的选取、内容的表达上即完成了一次对于传统经典文本的颠覆性再创作。韩国人气偶像剧《豪杰春香》通过对韩国家喻户晓的传统故事《春香传》的改写，在内容和形式两个层面上创新了表达方式，消解了传统叙事中朝鲜人民赞颂女主人公刚强不屈的美好品质而抨击贵族阶级骄奢逸的封建主义腐朽统治这一宏大主题，在将题材简化为一女两男的情感纠葛的同时完成了电视剧与后现代语境的充分契合。
此外，创作者通过对经典作品的经典细节的模仿与拼贴，对偶像剧在表述形式上进行后现念的艺术加工，完成了经典作品的差异化表达。如台湾偶像剧《流星花园》在当时掀起了偶像剧的收视狂潮，尽管该剧是由日本的漫画《花样男子》改编，但改编后的电视剧所获得的成功远远超过了原有漫画所引发的追捧效果，开创了偶像剧中一种王子与灰姑娘式的“经典模式”，之后日本、韩国、中国的偶像剧都纷纷翻拍和效仿。如《流星花园》中帅气的四大男主角F4的出场：多辆豪华轿车在一辆开路车引导下驶入了校园，学校的老师同学纷纷夹道欢迎，其气氛丝毫不亚于明星的闪亮登场。这一成功的偶像塑造画面在《花样男子》、《一起来看流星雨》中都有类似的呈现。
在符号修辞上，偶像剧借助消费奇观构造价值认同，以电视为媒介通过偶像塑造来传播都市文化，引导社会的消费价值走向。从索绪尔所揭示的“符号社会”到鲍德里亚所描绘的“消费社会”，青春偶像剧就是这一语境下的产物。
一方面，偶像剧的偶像呈现不仅是其类型特征所在，更是以此架构的消费幻境。偶像剧在偶像塑造方面的特质不仅巩固了青少年追逐前沿、紧跟社会潮流这类受众群体，而且在转型社会缺乏偶像的社会风潮中也为其扩大受众基础奠定了社会文化根基。偶像在偶像剧中是最具传播价值的符号之一，“偶像”的能指即指剧中的主要角色形象，而其所指则指对该人物自内而外全方位的阐释，比如内涵修养、仪表妆容等，这种表意形式成为偶像剧奇观建构的基础和受众诉求表达的最佳方式。韩剧的盛行在很大程度上得益于偶像符号意指的最大化拓展，它为整个影视奇观的建构奠定了绝佳的消费根基。以《浪漫满屋》为例，剧中偶像主要有女主角宋慧乔和男主角Rain，电视剧通过服装、化妆、发饰等等一系列人物外形符号塑造了两个时尚、俊美却又不失现实传统的偶像，让观众在接纳人物的同时不自觉地陷入了影视幻境，并在潜意识中试图通过对剧中偶像人物的模仿来重塑自我的生存环境。
另一方面，如果说以上所述的偶像符号的建构和偶像奢侈生活的营造直接诱导受众对影视幻境中消费奇观的追逐的话，那么在偶像剧中通过影视符号传递的都市文化则以隐喻的方式完成了受众对于精英消费社会符号幻境的价值认同。这里所谓的都市文化，脱胎于现代社会的城市文化，是在后现代主义的演变之下以思想和技术的发展变迁为支撑形成的“超城市”都市形态。由于这种都市文化与当代偶像剧中频繁出现的隶属于现代化大都市的相关画面符号，如高楼大厦、娱乐会场、奇装异服等相契合，因此通过偶像剧传播的都市文化就可能形成一个都市的特定文化表征，亦即所谓的“都市名片”，进而对塑造都市形象、带动都市化相关产业的发展发挥重要的作用。如《奋斗》中的取景地北京，剧中多次出现的西单、798工业区等等一系列都市符号共同描绘了北京作为一个国际化大都市的基本形貌，为都市文化的传播提供了借鉴。美国的文化研究学者戴安娜?克兰认为：“都市文化是阶级文化……它们反映了消费这些文化的社会群体的价值、态度和资源。”〔4〕偶像剧在获取受众对都市文化价值认同的同时，也以这些都市文化的符号为介质隐喻了消费都市文化的社会群体亦即精英群体的价值、态度和专属资源，从而为受众的都市消费创造了绝佳的条件。此外，“对都市文化的精英形式越来越影响的商业公司和都市开发者，并不是无功利性的……他们直接或间接试图从他们与这些文化形式的联系中牟利”〔4〕。
在传播特性的把握上，偶像剧以电视为载体完成了符码表征的消费建构。迄今为止，广告、电视和媒体通过对社会的彻底渗透而建构的一种新的消费类型标志着一个新旧社会的彻底断裂，这个建立在消费拟像之上的消费社会正是后现代主义思潮转向的结果。偶像剧依靠独特的艺术表征所建构的幻象之城，在当今消费社会形态下生成的传播价值延展了偶像剧都市时尚元素传递的时空——受众不仅仅满足于节目的观赏，而且通过与人的话题交流、现实消费的参照，推动着影像幻境与现实幻境的融合，完成了偶像剧的传播。受众试图通过现实中的物质消费无限接近偶像剧营造的幻境之城，亦即鲍德里亚所说的“超真实”“拟像”世界的形成。《蓝色生死恋》、《浪漫满屋》等脍炙人口的韩国偶像剧通过梦幻化的神话叙事、躯体镜语与类躯体镜语的反复呈现，建构了一个颇具崇拜价值的幻象之城。受众在接受剧作的都市时尚化偶像传播的同时，将这种审美价值认同传递给了消费社会的生产系统，无论是服装、化妆品、家私甚至建筑风格都趋于影像化，而受众更是试图通过物质消费参与超真实社会的拟造。
三、互文性与受众身份的重塑
电视的多义性和互文性是生产型受众诞生的基础，而生产型受众的诞生也为电视意义的多维解读创造了条件。费斯克认为，“电视多义性”不仅是指“文本建构时必然的庞杂性”，也指“不同社会地位的观众必然引发出的不同解释”〔5〕。从“电视多义性”出发，文本在垂直和水平两个向度上构成了电视文本的互文性，受众在以后现代为主的转型风潮、媒介素养等因素的制约下呈现出审美意识的泛化，这两个向度的相互作用建构了偶像剧开放多元的诠释空间。
文本的互文性是指文本在水平和垂直两个层面上相关因素之间的互相呼应，这些因素互相阐发，互相补充，为文本的解读提供了或共鸣或间离等多样化的审美渠道。文本的水平面互文性是通过类型、角色和内容等因素协作实现的，相同题材的不同文本之间、不同文本的相似角色之间表意符码的先在性、模式化影响就是如此。例如日本最具人气的漫画《花样男子》最早就由台湾改编为经典偶像剧《流星花园》，随后日本韩国先后改编为《花样少男少女》，地域差异下的三部偶像剧因内容的细微差别建构了偶像剧文本的水平互文性——剧中的四大男主角F4和女主角尽管名字各异，但由于情节相同而形成了趋同现象，为受众的影视读解提供了模式参考。
文本的垂直层面的互文性指的是原始文本与其他不同文本之间的相互指涉关系，费斯克区分了初级、次级、第三级三种电视文本。初级文本是电视机构制作完成的原初文本；次级文本是为初级文本做宣传或解读的副文本，可分为宣传策划类（广告)和媒介类（评论杂志、报纸、广播等）两种；三级文本指的是观众观看以后发生的反应或彼此的交流，如口头交谈、观众来信、网络评论等〔6〕。垂直层面的互文性在偶像剧中对于受众的解读起着关键作用，无论是次级文本还是三级文本，都深刻影响着受众对于原初文本的解读。如《一起来看流星雨》一剧，次级文本就以“芒果卫视自制剧”、“新版《流星花园》”等种种噱头为该剧的上映积累了充分的收视期待；而在《一起来看流星雨》上映之后，随着三级文本的盛行，受众对于该剧的解读就自然形成了各自的团体，他们或褒或贬或中立，完成了多维视域下的解读过程。
受众审美意识的泛化拓展基于后现代主义思潮下受众审美意识的转型，有助于受众的审美诉求在广度和深度上交错式地拓展。从利奥塔对后现代“就是针对元叙事的怀疑态度”的定义出发，后现代主义从根本上讲就是一种对权威和传统的颠覆，即反对单一，主张多元；解构中心，解放形式〔7〕。
受众审美诉求在广度上的拓展主要表现为受众审美意识的普遍觉醒以及审美活动的日常化、大众化。“审美”作为一项高度艺术化、精英化的活动，曾经与大众保持一定的距离，在技术发展支撑下，电视普及所带来的受众电视剧审美意识的觉醒日益迫使大众打破这种距离的间隔；而且偶像剧所特有的世俗化叙事方式也极大地拓宽了受众的年龄范围，使剧种脱离了精英阶层的观赏局限。因此，受众在试图吸收精英审美方式的同时，建立了后现代式的观影态度，最终形成了偶像剧审美的日常性和大众化。也就是说，多样化的审美范式不再被精英审美排斥于认同范围之外，任何人都可以对同一部电视剧做出个性化的审美品读。对偶像剧的审美更加深刻地证明了这一点。同一部《蓝色生死恋》，有人读出了男女间至死不渝之爱，有人为女主角的坚强执着所感动，有人则更深入地觉察到了韩剧隐晦的叙事策略所带来的卓越传播效果；《奋斗》中既有中国大学生为了生活而奋斗的拼搏精神，又有错综复杂的情感变迁，还有喧嚣琐碎市井生活的真实写照。
而在深度上，受众审美诉求的拓展主要表现为受众在视觉审美上的开掘，从而诞生了“身体审美”之审美范式。偶像剧，顾名思义是将青春靓丽的青少年进行偶像塑造，而“偶像”这一符号在电视语言中是极其具象化的，唯有通过视觉语言的多角度诠释，才能将“偶像”放置于兼具高度与前沿的位置。而这种视觉语言的“具象化”过程在偶像剧中突出表现为对主角身体的呈现，它强化了身体审美在偶像剧视觉审美范式中的特殊地位。“美学是作为有关身体的语言而诞生的。”〔8〕偶像剧的青少年受众多处于寻求自我价值和社会认同的人生阶段，而剧中青春偶像们的身体呈现恰好为他们提供了一种可供借鉴的、符合社会审美标准的镜像模式，使他们习惯于根据这一镜像来塑造自我的身体以及行为方式，以求更好地融入嬗变的社会场域。
参考文献：
〔1〕费斯克.解读电视〔M〕.郑明椿,译.台北：台湾远流出版社，1993:63.
〔2〕余乃忠.“后现代”概念的谱系学悬疑〔J〕.学术月刊，2010，（8）:27.
〔3〕让-弗朗索瓦里奥塔尔.后现代状态：关于知识的报告〔M〕.车槿山,译.上海：上海三联书店出版社，1997:2.
〔4〕戴安娜?克兰.文化生产：媒体与都市艺术〔M〕.赵国新，译.南京：译林出版社，2001：112，113.
〔5〕John Fiske.Television:Polysemy and Popularity〔J〕.Critical Studies in Mass Communication，1986，(3):391.
篇7
2202微信春节福袋最多能领几次
并没有设置次数，但是有网友表示玩了几次领了几次东西后，就再也收不到福袋的弹窗了。
这个是对于游戏福利，你可能有机会多次领取王者荣耀的道具福利，但每款道具福利你只有机会领取一次
同一个微信帐号参与活动次数不做限制，但不得使用作弊软件、外挂程序或其他违反法律法规、平台规则的手段参与。
篇8
“爆竹声中一岁除，春风送暖人屠苏。千户万户瞳瞳日，总把新桃换旧符。”今天春节已成为全世界普天同庆的节日，也是法定节假日中公休最长的，有中国“百节之首”之称，也成为2010年我申请“非物质保护遗产”的首要项目。
中国传统春节视觉文化正是这种重要族群事项的外在表达体系，是维系中国春节稳定发展，传承春节文化的有效途径。
审视中国春节视觉艺术的历史，分析多种多样的春节视觉艺术作品，我们发现其有一整套特定的支持观念和行为规则与方式，凡是以春节为题材表现的视觉艺术作品都是在反映和揭示春节特定意涵的范畴内思考与活动和表现。这与一般的视觉艺术创造活动有明显的区别。这种特殊的视觉文化通则和视觉文化符号系统，我们将其命名为“春节寓意的视觉效应表现机制”，主要指的是视觉主体、寓意主题、视觉对象三者之间的关系。
首先，我们从春节视觉主体出发。春节视觉主体主要指阅读和创造春节视觉文化的主体――人，在这里我们主要探讨人们参与春节视觉活动的主要内容即人的视觉能动感知过程，即人们通过身体的视神经器官感知事物的注意、感觉、体验、接受、反馈、传播过程。整个过程是一个主观能动的行为，它不止是眼睛和事物之间发生的关系，而是关乎到人类自身视觉传承文化的重要性。我们知道人类的整个感官系统在自身的生长发育和新陈代谢的需要下产生欲望，而这种天生对色、声、香、味、触的追求欲望让人类会主动的寻找能够满足自身欲望的事物，而这当中对视觉资源的寻找我们称之为“视觉欲望”。当人们的“视觉欲望得到满足，产生即欢喜之情时，人们又要想方设法把这种情绪与形象表现出来，描绘出来，并流传下去，这便产生了视觉传承”。所以说生活中那些能够帮助成长，使我们视神经产生视觉的事物，总会让我们永久记忆，快乐享受，促成了视觉传承。
因此从人的视觉感知过程角度出发，我们不难发现人们在春节视觉文化的色彩、线条、构图中所感受、认知、分析、选择产生的视觉内容，除了客观的呈现以外还包括生理和心理的需求。正是这种需求让人们在亲自体验春节魅力过程中形成了稳定的视觉传承体系。我们从色彩视觉感知过程出发，来认知春节视觉艺术时，发现正如克拉因色彩在情感价值表中所分析的：“红色给人的客观感觉是激动、豪华、跳跃，刺激人的，给人的生理感觉是兴奋，带给人的是热情勇敢的心理感受；黄色给人以闪耀、光明之感。”而既是百节之首又是举家团圆之际的――春节，所诉诸传递的快乐、幸福之感正需要红色、黄色、橙色等暖色系列的视觉颜色为之服务。从线条视觉感知过程出发，流动的线条更容易给人以欢乐、运动的视觉感受，所以春节视觉艺术中的线条应该多运用曲线、蛇曲线、折线、放射线、旋转线点状线等具有运动感的线条。这样才能展示出春节那种举家欢乐、其乐融融的氛围。从画面构图效果的视觉感知出发，大、满、全构图更能体现春节完满和谐之意。
另外人的视觉感知系统会随着科学技术的发展而有新的需求。今天媒体艺术不断的更新发展，带给人们的感知系统以新鲜的体验，改变了传统艺术在视觉、触觉上的局限，让人们在声、光、电的多维空间世界中，直观感受艺术的魅力。而中国传统春节的视觉艺术也应该借鉴媒体艺术这种载体，让它在体现传统文化基础上，展示出它的现代时尚气息。
中国的春节视觉创作不单符合视觉艺术展示的客观需要，更重要的必须关注到春节的服务主体――人，满足他们在春节中祈福、辟邪、团圆的美好梦想，注意中国人自身独有的视觉感知过程，生活经验、族群价值、观看方式。
其次，审视春节寓意主题。寓意主题是人们所要表达内容的经典提炼，是感性和理性高度结合之物。在中国春节文化的发展过程中，寓意主题是人们对春节文化传递的内容高度的凝练的一整套观念体系，是人们在长期的族群生活模式中为保持生命总结出的一种对春节文化概念的认识，是生命价值肯定的表现。春节伴随着中国人从远古走人现代，延续几千年，圆融地展示了中国人积极向上的宇宙观、生命观、价值观，记录着中国人民追求美好生活的梦想、勤劳智慧的选择、伦理道德观的标准，展示着中国人的热情，传承着丰富多彩的民俗生活。在这个漫长的春节发展历史中所逐渐形成的一套完整寓意主题观念，供所有视觉创作使用，它们便是欢庆祥和的生活观、伦理教化的道德观、求福避邪的生命观、娱乐休闲的情趣观、神话传说的变文观、民俗活动的变异观。
再次，审视春节视觉对象，主要指的是在春节活动中人们能感知的具备视觉性的艺术形态，包括以中国传统春节为创作主题的绘画、雕塑、书法、设计造物等形态，或日：以视觉表现方式展示与春节相关内容的艺术。以人为主体的春节视觉感知活动过程不能缺失视觉对象，如果确缺失视觉对象，整个视觉感知过程就不能成立，从而春节的寓意就只能是一种想象或潜在价值，春节就不能更好地彰显其传播丰富人文精神的价值。在现实生活中人们无时无刻不在寻求观看的对象，同时也在审视所观对象的品质，并在那些自认为值得肯定的品质里获得和满足，一定的可观可赏的视觉对象的选择和创造，就显得重要和必需了。春节视觉对象是春节寓意结果的物化，是人们春节价值观视觉意图转化的表现，是中国人艺术化生活的再现，它是春节文化除了信仰传承、行为传承、语言传承之外的另一种传承方式――视觉传承的展现。因此春节视觉对象的品质直接映射出时代的风尚、科学的进步、生活的品质、艺术的水平。
每逢春节之时，环顾周围的景致，到处活跃着视觉艺术的元素。祭祀的神像、祖宗图示、家居环境和个人穿着的装饰、宴桌上美味可口的食品、街市上各种精彩表演、儿童手中憨态可掬的玩具、夜晚造型丰富的灯饰……构成了一幅幅动人的画面。人们在五彩缤纷的春节视觉对象中，尽情的狂欢玩耍，好一派繁花似锦的图卷！难以想象在缺失视觉对象的春节活动中，是怎样的面貌与情景？因此，我们认为春节视觉艺术是中国传统春节文化中重要的构成元素，不可忽视、不可不究。由此也进一步证明定位研究“中国传统春节寓意的视觉效应表现机制”的价值。
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1 材料与方法
11 材料pRIZ1 RH质粒由本研究组保存；原核表达载体质粒pGEX6P3购自Amersham Biosciences公司，是一种融合蛋白表达载体，含一个可编码谷胱甘肽S转移酶(GST)的读码框架，其下游有多克隆位点，插入符合相应读码框架的外源基因片段，在IPTG的诱导下可表达出与GST相融合的蛋白质；大肠杆菌CM1061菌株（购自New England Biolabs）、大肠杆菌BL21（DE3）表达菌株（购自EMD Bioscienses）由本课题研究组保存；Pfu DNA聚合酶等PCR试剂购自Stratagene公司；PCR产物纯化试剂盒(QIAquick PCR Purification Kit)、大量质粒提取试剂盒(QIAGEN Plasmid Maxi Kit)为QIAGEN公司产品；限制性内切酶EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ购自Fermentas公司；T4 DNA连接酶购自New England BioLabs公司； Glutathione Agarose吸附柱购自Sigma公司；人组蛋白 H3购自upstate公司；AdenosylLMethionine，S［methyl3H］ 购自PerkinElmer公司；BioRad蛋白测定试剂盒购自BIORAD公司。
12 PCR引物的设计与合成目的基因为含PR结构区的PR200基因片段，位于RIZ1全基因序列的第1~600个核苷酸(nt1600)。通过GenBank检索RIZ1的cDNA序列，采用DNA Star软件设计PCR引物，上游引物（GSTPR200P1）序列为：5′ACCGAATTCCATGGAAGTGAGGCTTTTCCCTTC3′，含EcoRⅠ酶切位点及启始密码子；下游引物（GSTPR200P2）序列为：5′CTCCTCGAGTCATTATGCAGAG GTGAAATCTGGCT3′，含终止密码子及XhoⅠ酶切位点。引物由Invitrogen公司合成。
13 目的基因的PCR扩增以 pRIZ1 RH质粒为模板，以GSTPR200 P1、GSTPR200 P2为引物，采用Pfu DNA聚合酶PCR扩增目的基因。阴性对照以等量去离子水代替模板。其反应条件为：95℃ 13min 热启动；95℃ 30 s，55℃ 30 s，72℃ 60 s，30个循环；最后72℃延伸10min。取PCR产物5μl，DNA Marker 1μl，经2 % 琼脂糖凝胶电泳后，在紫外灯下观察结果。产物纯化后经ABI PRISMTM 310 型基因分析仪（PERKIN ELMER） 测序确认。
14 重组载体的构建
141 PCR反应产物的纯化 将以上PCR产物点样于2 %的琼脂糖凝胶进行电泳，使用PCR产物纯化试剂盒纯化回收，用20μl去离子水溶解，取1μl在2 %琼脂糖凝胶电泳上检查，纯化成功后－20℃贮存。
142 载体pGEX6P3的制备 将原核表达载体pGEX6P3转入大肠杆菌CM1061菌株。挑取单个菌落培养，用质粒提取试剂盒大量提取质粒DNA，溶解于50μl的去离子水中。－20℃贮存。
143 PR200－pGEX6P3原核重组表达载体的构建 将纯化后的PCR 产物和pGEX6P3表达载体同时分别用核酸内切酶EcoRⅠ与XhoⅠ双酶切， 并分别用PCR产物纯化试剂盒纯化，氯仿抽提法回收。在T4 DNA连接酶作用下，连接含PR 基因片段与表达载体获得了PR200－pGEX6P3重组质粒（5 498 bp）。
15 表达重组蛋白阳性克隆的检测与鉴定用PR200－pGEX6P3重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）表达菌株， 涂布含100mg・L-1 AMP 的LB琼脂平板，37℃恒温培养过夜，平板上长出较好菌落。挑取阳性菌落接种在10ml含青霉素抗性的LB 试管中，37℃剧烈振荡培养过夜。次日按1∶60的比例接种过夜，培养物于15ml含青霉素抗性的LB 试管中，于37℃剧烈振荡培养至OD600 nm为05～08，均分该培养物为两部分，一部分加入异丙基β硫代半乳糖苷(IPTG)至终浓度为1mmol・L-1以诱导GSTPR200表达，另一部分不加IPTG作对照，继续培养5 h，每隔1h两部分各取1ml 培养物离心后留沉淀细胞置-70℃冷冻过夜。采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS PAGE)法，检测与鉴定能够表达与GST融合的含PR结构区蛋白质(GSTPR200融合蛋白)的阳性菌落。
16 GSTPR200融合蛋白的提纯与质谱分析挑取GSTPR200融合蛋白表达阳性菌落接种在10ml含青霉素抗性的LB 试管中，37℃剧烈振荡培养过夜，次日按1∶60的比例接种于400ml含青霉素抗性的LB 培养瓶中，于37℃剧烈振荡培养至OD600 nm 为05～08，加入IPTG至终浓度为1mmol・L-1以诱导GSTPR200表达，继续培养40～50 h。离心收取细胞，置-70℃冷冻过夜。次日用5ml PBST重新悬浮细胞，于4℃温度下超声破碎细胞，利用Glutathione Agarose吸附柱提纯GSTPR200融合蛋白。通过WatersMicromass LCT质谱系统（Waters公司）分析该蛋白质的分子量。
17 纯化GSTPR200融合蛋白的组蛋白甲基化转移酶(HMT)活性测定
采用BioRad蛋白测定试剂盒检测纯化的GSTPR200融合蛋白浓度后，按组蛋白HMT测定法分析该蛋白质的活性［8］。反应体系如下：总容积为40μl，含20mmol・L-1 TrisHCl （pH 80），02 mol・L-1 NaCl，04 mmol・L-1 EDTA，1 mmol・L-1 DTT，4 μg 纯化的GSTPR200融合蛋白或GST蛋白（阴性对照），5μg组蛋白H3，3μl （165μCi）AdenosylLMethionine，S［methyl3H］。 各反应混合物于37℃孵育10～20 h 后，分别取5μl（各设3个测定样品，共取15μl）反应物在P81上点样、冲洗、晾干，采用LS 6000IC型液闪仪（BECKMAN公司）测定每分钟脉冲数（CPM）以说明蛋白质HMT活性度。
2 结果
21 PCR扩增的目的基因PCR扩增产物长度为625 bp，其中目的基因为600 bp，引入扩增产物两端的限制性内切酶识别位点序列、启始密码子与终止密码子识别位点序列及保护碱基长25 bp。同DNA相对分子质量参照物相比，PCR扩增产物的大小与预测的结果一致（图1）。
图1 PCR 扩增PR200的结果(2 %琼脂糖电泳)（略）
Fig 1 Amplification of PR200 with PCR (2 % agarose gel)
1 DNA ladder；2 Negative control；3 PCR product
22 检出的表达重组蛋白阳性克隆经SDSPAGE蛋白电泳，考马斯亮蓝R250染色观察，包含重组质粒的诱导菌在相对分子质量47 000位置出现一蛋白条带，而未诱导的重组质粒转化菌在相应位置的蛋白条带要弱得多；含质粒pGEX6P3的诱导菌在相对分子质量27 000位置出现一条带。目的基因表达的多肽相对分子质量为19700，与融合蛋白共同表达相对分子质量约为47 000，与理论估计值相一致。见图2。
图2 IPTG诱导转化大肠杆菌BL21（DE3）菌株表达的SDSPAGE 结果（略）
Fig 2 SDS PAGE showing the IPTGinduced expression of the transformed Ecoli BL21（DE3）cells
1标准蛋白质；2未诱导的转化pGEX6P3的BL21细胞；3诱导后的转化pGEX6P3的BL21细胞；4、6、8分别为未诱导的三个菌落的转化PR200－pGEX6P3 BL21细胞；5、7、9分别为诱导后的三个菌落的转化PR200－pGEX6P3 BL21细胞。 每泳道加样量约15μg， 12 % 胶。
1 Standard proteins; 2 Uninduced BL21 cells of pGEX6P3 transformed clone; 3 Induced BL21 cells of pGEX6P3 transformed clone; 4，6，8 Uninduced PR200pGEX6P3 transformed BL21 cells of three clones，respectively; 5，7，9 Induced PR200pGEX6P3 transformed BL21 cells of three clones， respectively 15μg per lane， 12 % gel
23 GSTPR200融合蛋白的纯化与质谱分析通过Glutathione Agarose吸附柱提纯的GSTPR200融合蛋白经SDSPAGE蛋白电泳，考马斯亮蓝R250染色，在相对分子质量47 000位置呈现单一的蛋白条带（图3）。质谱分析可见46980 处出现单一峰，进一步明确了该纯化融合蛋白质与预期的分子质量一致（图4）。
图3 GSTPR200融合蛋白纯化的SDSPAGE 结果（略）
Fig 3 SDSPAGE showing the purification of GSTPR200
1：标准蛋白质；2：诱导后细胞破碎液；3：通过柱子后的细胞破碎液；4：洗柱液； 5，6：蛋白洗脱液。 每泳道加样量约15μg， 12 % 胶。
1 Standard proteins；2 Induced lysate；3 Through flow；4 Washing flow；5，6 Elutions 15μg per lane， 12 % gel
图4 纯化GSTPR200融合蛋白质谱分析结果（略）
Fig4 Mass spectrometry analysis of the purified GSTPR200
24 GSTPR200融合蛋白对组蛋白甲基化作用采用HMT测定法可见，GSTPR200融合蛋白组CPM（孵育1、2 h后的3个样本CPM均值分别为817±58、1192±83）明显高于对照组（GST蛋白质组，分别为135±12、184±21）， 两者差异具有高度显著性（P
3 讨论
PR结构域是肿瘤抑制因子RIZ1的功能区域，本研究为了原核表达与纯化含该结构域的融合蛋白质（GSTPR200融合蛋白），选用了pGEX6P3载体。该载体具有GST 融合特征，可利用此标签进行纯化。采用大肠杆菌BL21（DE3）表达菌的优点在于该菌T7 RNA聚合酶基因可受IPTG诱导表达，而且该菌没有膜结合性蛋白分解酶活性，可抑制表达的融合蛋白质分解。本研究通过将重组载体PR200－pGEX6P3转入BL21（DE3）表达菌，成功地构建了GSTPR200融合蛋白的原核表达系统，并提纯了该融合蛋白质。研究发现PR结域能够使组蛋白H3中的第9赖氨酸甲基化，而人癌组织因PR结构域基因突变造成RIZ1甲基转移酶活性降低［89］。本研究为了了解所获得的GSTPR200融合蛋白是否具有甲基化活性，采用HMT测定法对提纯的融合蛋白质进行了检测。由于组蛋白H3与甲基在HMT的作用下可形成甲基化组蛋白H3，根据这一原理以3H标记甲基（［3H］methyl），将其与组蛋白H3及受检测的蛋白一起反应，通过测定CPM可反映形成的甲基化组蛋白H3的量，以说明该蛋白的HMT活性。本研究中纯化的GSTPR200融合蛋白组CPM比对照组（GST蛋白质组）明显增高，表明得到的融合蛋白质中PR部分具有HMT活性。本研究纯化蛋白的大量获取为进一步研究RIZ1 PR区域的结构与功能奠定了基础。
［参考文献］
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篇10
【Keywords】 Mycobacterium tuberculosis; cloning; expression; purification
【摘要】 目的：克隆结核分枝杆菌（Mtb）Rv2450基因，序列测定正确后进行融合表达、纯化. 方法：采用聚合酶链反应（PCR）从Mtb H37Rv基因组中扩增出Rv2450编码基因，序列测定正确后，亚克隆到融合表达载体pProEX HT中，转化大肠杆菌DH5α，目的基因经IPTG诱导，由T7启动子调控表达带6个组氨酸残基的Rv2450蛋白，在变性条件下对目的蛋白进行亲和层析纯化. 结果：得到融合6个组氨酸残基的Rv2450蛋白纯度大于90%. 结论：构建了Mtb Rv2450基因的重组表达载体，并获得了高纯度的融合表达蛋白.
【关键词】 结核分枝杆菌；克隆；表达；纯化
0引言
近年来，结核病的发病率迅速回升，成为世界性的问题. 目前，全世界约有1/3的人感染，每年约800万的新发病例和300万的患者死亡，因而寻找更有效的替代卡介苗的疫苗已成为当务之急. Rv2450蛋白是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis， Mtb) RPF蛋白家族的一员，序列分析发现，它不仅与细菌的增殖有关，还有可能是宿主免疫系统识别的一个靶抗原［1］. 因此我们克隆表达并纯化Rv2450蛋白，以期进一步研究其免疫特性，评价其是否可作为候选结核亚单位疫苗的组分.
1材料和方法
1．1材料
7H9液体培养基购自Difco公司；Mtb H37Rv株为陕西省结核病防治研究所惠赠；Taq DNA聚合酶，dNTPs，T4连接酶，HindⅢ，BamHⅠ及DNA电泳胶1回收试剂盒、pGEM Teasy质粒购自Promega公司； E.coli DH5α和pProEX HT质粒为本室保存；金属鳌合亲和层析介质（NiNTA）购自Qiagen公司.
1．2方法
Mtb Rv2450全基因序列的特异性引物序列为：P1：5′GCGGATCCAAGAACGCCCGTACGACG3′，含BamHⅠ酶切位点；P2：5′GCAAGCTTTGCGTCTTTTCGCGGTGG3′，含HindⅢ酶切位点和终止码. 均由西安隆恩公司合成. 取少量Mtb H37Rv株接种于7H9液体培养基中，37℃培养2 wk. 取5 mL液体培养物以9000 g离心10 min，将沉淀重悬于50 μL裂解液（10×PCR缓冲液5 μL，45 g/L吐温20 5 μL，45 g/L NP40 5 μL，20 g/L蛋白酶K 0.5 μL及水34.5 μL）中，置于55℃水浴1 h，95℃水浴10 min使蛋白酶K灭活，再以9000 g离心1 min，取上清，用酚氯仿抽提，无水乙醇沉淀，溶于20 μL水中备用. 以Mtb H37Rv基因组为模板，以P1和P2为引物做PCR，经30个循环后，用PCR产物清洁试剂盒回收PCR产物. 然后将其与pGEM Teasy载体按3∶1的比例混合，用T4连接酶连接，转化用CaCl2低温制备的E.coli DH5α感受态细胞. 然后涂布于LB平板（含氨苄青霉素100 mg/L），以蓝白法随机筛选6个白色菌落，分别接种于5 mL含氨苄青霉素的LB培养液中，37℃振荡培养过夜，碱裂解法提取质粒DNA. 将提取的质粒DNA用HindⅢ和BamHⅠ双酶切，37℃ 2 h，进行10 g/L的琼脂糖凝胶电泳，以DL2000为分子大小参照，观察有无约529 bp大小的片段，然后随机挑取2个克隆进行测序. 碱裂解法提取pGEM Teasy重组克隆质粒，用HindⅢ和BamHⅠ双酶切，经10 g/L琼脂糖凝胶电泳，回收目的基因条带，溶于20 μL水中. 取目的片段和同样用HindⅢ和BamHⅠ双酶切的pProEX HT质粒以1∶1的比例混合，用T4连接酶连接，转化用CaCl2低温制备的E.coli DH5α感受态细胞. 然后涂布于LB平板（含氨苄青霉素100 mg/L），37℃培养过夜. 随机挑取6个菌落，分别接种于5 mL含氨苄青霉素的LB培养液中，37℃振荡培养过夜. 各取3 mL碱裂解法提取质粒DNA，再以HindⅢ和BamHⅠ双酶切鉴定，挑选阳性克隆. 将4个阳性克隆分别接种于5 mL含氨苄青霉素的LB培养液中，37℃振荡培养18 h，分别取50 μL加到5 mL含氨苄青霉素的LB培养液中，37℃振荡培养2~3 h，IPTG诱导4 h，进行120 g/L SDSPAGE，并通过凝胶薄层扫描测定其表达量.
将所构建的重组菌pProEX HT2450在选择LB培养液中37℃振荡培养18 h，取50 μL加到5 mL选择LB培养液中37℃振荡培养2~3 h ，1 mmol IPTG诱导4 h，进行120 g/L SDSPAGE，并转移至硝酸纤维素膜上，用10 g/L BSA封闭过夜，加抗组氨酸的特异性mAb作用1 h，以10 mmol/L PBS（pH 7.2）洗涤后，加HRP标记的羊抗鼠IgG作用1 h，以DAB显色观察表达产物. 将制备好的包涵体重悬于20 mL缓冲液A中，室温搅拌2 h，使包涵体完全溶解，10 000 g离心30 min后，将上清液加入到用缓冲液A平衡过的NiNTA agarose柱上，然后分别用5倍柱床体积的缓冲液B，10倍柱床体积的缓冲液C，2倍柱床体积缓冲液D，2倍柱床体积缓冲液E洗柱，最后用10 mL缓冲液F对目的蛋白进行洗脱，分步收集，每管约1 mL. 取各管收集液15 μL，加入等量2×上样缓冲液，37℃温育10 min，经120 g/L SDSPAGE检测，将含有目的蛋白的各管合并，在变性条件下纯化融合Rv2450蛋白［2］. 采取逐步降低尿素浓度的方法，除去蛋白溶液中的尿素，使变性的蛋白在此过程中自然复性，先用含6 mol/L尿素的缓冲液4℃透析过夜，然后分别用4， 3， 2， 1和0.5 mol/L尿素的梯度透析各4 h以上，最后用PBS缓冲液再透析4 h以上. 透析结束后，将蛋白溶液在4℃下10 000 g离心10 min，上清即为可溶的复性蛋白，将其分装后冻干备用.
2结果
2．1Rv2450基因的扩增、克隆及序列分析应用上述合成的两种引物，以分支杆菌H37Rv基因组为模板，扩增Rv2450的基因序列，取PCR产物5 μL，10 g/L琼脂糖电泳，电泳结果显示（Fig 1），PCR扩增产物约为529 bp的片段. 将PCR扩增产物克隆于pGEM Teasy中，挑选经酶切鉴定正确的克隆，经正反向全自动序列分析，所得序列结果与GenBank公布的序列完全相同.
2．2Rv2450基因表达载体的鉴定将纯化的重组质粒pGEM Teasy用HindⅢ和BamHⅠ双酶切，回收529 bp产物，与用相同酶切的pProEX HT质粒连接，转化E.coli DH5α感受态细胞，然后在选择平板上随机挑选3个克隆，提取质粒用HindⅢ和BamHⅠ双酶切，有2个克隆切出529 bp的片段，将1号阳性克隆命名为pProEX HT2450（Fig 2）.
2．3重组质粒的表达及其产物的鉴定将重组质粒pProEX HT2450转化E.coli DH5α感受态细胞，1 mmol IPTG诱导4 h，进行120 g/L SDSPAGE，发现约在Mr为22 000处有1条蛋白带，同预计的大小相吻合（Fig 3）. 经凝胶薄层扫描，测得重组菌表达带的蛋白量约占菌体总蛋白量的24%. 对表达蛋白的可溶性分析证明，融合表达产物主要以不可溶的包涵体形式存在（Fig 4）. 将表达蛋白与抗组氨酸的特异性mAb做免疫印迹，发现在Mr 22 000处表达有一条带，表明此表达产物含有能与抗组氨酸的特异性mAb相结合的表位（Fig 5）.
2．4表达蛋白的亲和层析纯化从重组菌中制备的包涵体经洗涤后，用8 mol/L尿素变性，上到NiNTA金属鳌合亲和层析柱上，由于pProEX HT质粒多克隆酶切位点上游插入编码6个连续组氨酸残基的序列（6×His tag），在重组质粒进行诱导表达时，6×His tag与外源插入片段共同表达，因而融合蛋白带有6×His tag，后者可与金属镍发生鳌合，从而使目的蛋白在流经柱床时被特异性吸附，再利用咪唑置换，洗脱下特异性结合的蛋白. 120 g/L SDSPAGE证明了这种方法的有效性（Fig 6），经薄层扫描分析融合蛋白纯度可达90%以上. 将分步收集液中含目的蛋白的各管合并，缓慢、逐步降低透析液中尿素的浓度，使变性的蛋白在此过程中自然复性，复性后的目的蛋白经冻干保存，以便于进一步的研究工作.
3讨论
Micrococcus luteus可分泌一种复活促进因子（resuscitationpromoting factor， Rpf）以刺激该菌休眠体复活和生长，促进繁殖体生长，与真核细胞的细胞因子相似，具有自我刺激作用，所以又称细菌因子. 该因子也可以刺激其他种类的高G+C%革兰阳性菌，包括Mtb［3］. Mtb全基因序列分析表明，其中Rv2450c，Rv0867c，Rv1009，Rv2389c和Rv1884c基因与Micrococcus luteus菌Rpf基因同源，其中4个基因编码的蛋白是分泌蛋白，推测结核杆菌这些基因编码的蛋白可能也具有Rpf作用，但尚无直接证据［4］. 巨噬细胞内Mtb的分离培养时发现，巨噬细胞内Mtb由于菌体受到损伤或处于休眠状态，而在体外生长困难，所测的单位体积内细菌形成单位明显低于实际细菌密度，当加入Micrococcus luteus菌的Rpf后，可促进受损伤菌体或处于休眠状态的菌体复苏和生长，生长数量明显增加，敏感度增高［5］. 对Mtb的Rpf样蛋白家族功能研究将有助于结核病复发感染的控制，还可以探讨Rpf样蛋白在体外刺激Mtb的复苏和生长作用，使用Rpf建立Mtb快速、敏感的培养方法，改进临床检验上常规结核杆菌的分离培养和药物敏感实验方法，缩短所需时间，提高检验的敏感度；同时我们还可以探讨Rpf样蛋白可否刺激机体产生相对应的中和抗体，阻断Rpf样蛋白对Mtb的作用，是否可以做为预防和治疗Mtb感染的疫苗. 我们利用融合表达载体pProEX HT表达了氨基端带有6个组氨酸残基的Rv2450，该蛋白以包涵体的形式存在，在变性条件下，利用金属鳌合亲和层析对目的蛋白进行了纯化，并利用缓慢透析的方法使部分目的蛋白得到了复性.
参考文献
［1］ Vladimir V， Yeremee V， Tatiana K， et al. Protein of the Rpf family: Immune cell reactivity and vaccination efficacy against tuberculosis in mice ［J］. Infect Immun， 2003;71(8):4789-4794.
［2］ 杨敏，刘新平，韩炯，等. 乙型肝炎病毒Pres基因的克隆表达及亲和层析纯化［J］. 第四军医大学学报，2001；22（16）：1493-1496.
Yang M， Liu XP， Han J， et al. Cloning and fusion expression of HBVPres gene and its purification using affinity chromatography［J］. J Fourth Mil Med Univ， 2001;22(6):1493-1496.
篇11
Research about the bonding strength of nanometer amorphous diamond film on the surface of dental pure Ti and Co-Cr alloys substrates
CHEN Gang1,ZHAO Xiao-lin1,LI Bin2,YAO Yue-ling2
(1.Department of Stomatology,the 323rd Hospital of PLA, Xi'an 710054, Shaanxi,China;2.Department of Prosthodontics,Stomatological College,Fourth Military Medical University,Xi'an 710032,Shaanxi,China)
Abstract:ObjectiveTo study the bonding strength of nanometer amorphous diamond film on the surface of dental pure Ti and Co-Cr alloys substrates and influence of the thickness of film on bonding strength. MethodsWe respectively prepared 20 wafers of pure Ti and Co-Cr alloys. Both the wafers of pure Ti and Co-Cr alloys were divided into two groups(a1、b1 and a2、b2) .The groups a1 and a2 were plated with nanometer amorphous diamond film in thickness 50nm and the groups b1 and b2 were plated with the film in thickness 100nm. Finally, we used scratch test to measure the adhesion(Lc) of nanometer amorphous diamond film on pure Ti and Co-Cr alloys substrates. Results There was significant difference between the groups a1 and a2 on Lc, so was the difference between the groups b1 and b2 as well. Moreover，in the same thickness, there was significant difference between pure Ti and Co-Cr alloys on Lc.ConclusionNanometer amorphous diamond film can be adhered well to dental pure Ti and Co-Cr alloys substrates and its thickness will obviously influence the bonding strength，therefore, we should choose the more appropriate thickness. In the same thickness, the adhesion of nanometer amorphous diamond film on pure Ti substrate is better than Co-Cr alloys substrate.
Key words:nanometer material;amorphous diamond film;bonding strength; pure Ti;Co-Cr alloys
纳米非晶金刚石薄膜是将金刚石、类金刚石薄膜制备工艺与纳米技术相结合的产物，是一种新型的功能薄膜材料。在纳米非晶金刚石薄膜的应用中，首先要求薄膜与基体之间具有足够的界面结合强度，这也是保证薄膜满足力学、物理和化学等使用性能的基本前提。本实验目的在于研究纳米非晶金刚石薄膜与牙用纯钛及钴铬合金表面的结合强度以及镀膜厚度对结合强度的影响，从而为纳米非晶金刚石薄膜的实际应用提供科学的依据。
1材料和方法
1.1材料与仪器设备：JM-2型纳米金刚石镀膜机（西安百纳科技有限公司生产）；薄膜结合强度测试仪，显微镜（西安轻工钟表研究所）；纯钛棒材（陕西宝鸡有色金属总公司）；硬质钴铬合金锭（上海常平牙科材料有限公司）。
1.2 试件的制作：先将硬质钴铬合金锭铸造成直径20mm、长15cm的圆棒，随后分别从已铸造的钴铬合金圆棒和成品纯钛棒材上截取直径15mm、厚度2mm的圆片各20个，表面用200＃，400＃，600＃，900＃，1000＃，1200＃金相砂纸逐级打磨、抛光、中性洗剂清洗脱脂，丙酮超声清洗，干燥后备用。
1.3实验分组：将纯钛试件随机分成实验组a1与 b1两组，每组10个；钴铬合金试件也随机分成实验组a2与b2两组，每组10个。
1.4试件的镀膜处理：将各组试件固定于JM-2型纳米金刚石镀膜机内，试件首先进行镀膜前极化预处理，随后实验组a1与a2的试件表面镀膜8min（膜厚50nm），实验组b1与b2的试件表面镀膜15min（膜厚100nm），出炉后备用。
1.5实验方法：按镀膜结合强度测试标准GB/T8554-1997，用薄膜结合强度测试仪测试纯钛和钴铬合金试件的膜/基结合强度（120°锥角，SR0.2mm金刚石划头）。X100、X400显微镜观察结果。
1.6数据统计：用SPSS统计软件(SPSS10.0版本)对测试所得各试件的膜基临界载荷Lc进行统计学分析(两样本t检验)。
2结果
纯钛和钴铬合金不同镀膜厚度试件测试所得膜/基结合强度（膜基临界载荷Lc）统计分析结果见表1。用SPSS统计软件进行两样本t检验得：（1）实验组a1与实验组b1的膜基临界载荷Lc之间存在显著性差异（P＜0.05），实验组a1的膜/基结合强度略高于实验组b1；（2）实验组a2与实验组b2的膜基临界载荷Lc之间存在显著性差异（P＜0.05），实验组a2的膜/基结合强度略高于实验组b2；（3）膜层厚度相同时，纯钛和钴铬合金试件的膜基临界载荷Lc之间存在显著性差异（P＜0.05），纯钛试件的膜/基结合强度高于钴铬合金试件。
3讨论
纳米非晶金刚石薄膜是一种新型的类金刚石薄膜，目前已有多位国内学者将其应用于口腔义齿材料的表面改性处理［1-4］，实验结果证明纳米非晶金刚石薄膜在口腔医学领域具有广阔的应用前景。
纳米非晶金刚石薄膜应用于口腔义齿材料的表面处理，其首要前提是薄膜与口腔义齿材料表面能够形成很好的结合，否则薄膜容易在应用中产生裂纹、皱褶、甚至脱落。金刚石、类金刚石薄膜的膜/基结合强度是评价薄膜质量的关键指标［5］，目前有多种方法测量膜/基结合强度，例如划痕法、直接拉伸法、刮削式测量法等，其中划痕法应用较为普遍。划痕法以膜/基临界载荷（Lc）为测试参数，实验条件简单易行，可重复性强，对基底材料的性能、表面状态、薄膜的性能等具有较高的敏感性，其测量结果可用于对薄膜结合强度的定性描述。
采用划痕法做结合强度测试是在划痕试验机上进行。具体方法是用一个半球形刚性压头，在垂直载荷作用下，划过镀膜试样表面，逐渐增加载荷，直至薄膜出现剥落，此时所加载的力的大小为膜/基临界载荷（Lc）［6］，单位为力学单位牛顿（N）。在划痕过程中，薄膜受压应力作用开裂，界面剪切破坏，在摩擦作用下脱落，所以实验结果反映的是界面剪切强度。
影响薄膜结合强度的因素有很多，内应力是决定薄膜稳定性和寿命的重要因素，内应力高的薄膜在应用中更容易产生裂纹、褶皱、甚至脱落，所以制备的薄膜最好具有适中的压应力。分析表1的数据结果可知，无论是纯钛还是钴铬合金试样，其镀膜50nm厚度者的膜/基临界载荷（Lc）均高于镀膜100nm厚度者，两者之间存在非常显著的统计学差异（P＜0.05），该结果与钟科等学者研究纳米非晶金刚石薄膜与义齿基托树脂材料结合强度所得结果相类似［1］。由此可见，相同材料的试件表面，由于镀膜时间不同，所得薄膜厚度不同，其结合强度亦不同；这是因为薄膜的内部应力决定薄膜的稳定性和使用寿命，薄膜越厚，内应力越大，稳定性越差，膜/基结合强度越低，在划痕试验中，在较小的载荷下薄膜更容易发生剥脱［7］。
衬底材料性质也是影响薄膜结合强度的一个重要因素。分析表1的数据结果可以发现，在镀膜厚度相同的情况下，纯钛表面镀膜的膜/基临界载荷（Lc）均高于钴铬合金，两者之间存在非常显著的统计学差异（P＜0.05）。我们知道，薄膜从基底上剥落，最常见的有两种类型：一种是薄膜与基底结合不好，在薄膜与基底之间未形成过渡区，在受到较大外力时，薄膜很容易从基底上完全剥落；第二种类型是薄膜与基底之间己形成过渡区，有较高的结合强度，只在薄膜内应力过大的情况下，才会出现破损，导致脱膜。因此，薄膜与基底之间形成过渡区可以有效提高薄膜的结合强度，而这一点取决于衬底材料的性质。已有研究证实，钛是一种强碳化物形成元素，用钛金属做衬底材料沉积金刚石薄膜时，在钛金属与金刚石薄膜之间可形成以TiC为主要成分的过渡层从而有效提高薄膜的结合强度［8］。
实验研究表明：纳米非晶金刚石薄膜可以与纯钛及钴铬合金材料达到较好的结合；镀膜厚度相同时，纳米非晶金刚石薄膜与纯钛表面的结合强度优于钴铬合金；此外，50nm厚度的镀膜与纯钛及钴铬合金表面的结合强度大于100nm厚度者，因此，在纯钛及钴铬合金表面镀制纳米非晶金刚石薄膜应该选择适宜的膜厚，并非是越厚越好。
[参考文献]
[1]钟 科,姚月玲,黎永钧,等.纳米非晶金刚石薄膜与热凝义齿树脂材料的结合力研究[J].中国美容医学，2003，12(1)：63-65.
[2]李 斌,姚月玲,安银东,等.纳米非晶金刚石膜抗口腔白色念珠菌粘附作用的研究[J].中国美容医学,2005，14(2)：203-204.
[3]孙 延,姚月玲,黎永钧,等.纳米非晶金刚石薄膜对树脂人工牙耐磨性及其影响因素的实验研究[J].中国美容医学，2004，13(1)：60-62.
[4]陈 钢,姚月玲,李 斌,等.纳米非晶金刚石薄膜对纯钛腐蚀性能的影响[J].中国美容医学，2005，14(1):60-62.
[5]Kurt H，Stem．Metellurgical and Ceramic Protective Coating[M].London：Chaopman＆Hall，1996：306-333．
[6]侯晏红,曹学亮,吴一平,等.Ti-Al-N系功能梯度薄膜结合强度的实验研究[J].功能材料,2000，3(增刊):87-88.
篇12
1 临床资料
1.1 一般资料本研究共筛选出60名符合纳入标准的PSD患者,来源于广东省第二中医院康复科2008年3月至2010年5月间住院病例。在获取知情同意后,按照就诊顺序编号,查阅SAS8.0软件产生的随机数字表,分配到对照组和治疗组。其中对照组29例,男16例,女13例,年龄42-78岁,平均年龄62.5,病程3-14个月,平均7.3月。治疗组31例,男19例,女12例,年龄40-81岁,平均年龄64.1,病程2-16个月,平均7.9月。经t检验,两组患者年龄、性别、病程方面没有显著性差异。
1.2 纳入标准及排除标准
1.2.1 纳入标准:f1)符合CCMD-3抑郁症的诊断标准;(2)诊断工具采用汉密尔顿抑郁量表[3](HAMD)24项计分,总分20分为轻,中度抑郁,>35分为严重抑郁;(3)愿意受试并能合作的患者,均可纳入。
1.2.2 排除标准:(1)器质性精神障碍或精神活性物质和非成瘾物质所致抑郁,重度抑郁症有严重自杀倾向者;(2)患者在进行测评前2周内接受过任何形式抗抑郁治疗的;(3)合并有心脑血管、肝、肾和造血系统等严重原发性疾病者;(4)凡不符合纳入标准,未按规定治疗。无法判定疗效或资料不全等影响疗效者。
2 方法
2.1 治疗方法对照组:口服氟西汀胶囊20mg,每日一次,连续服用8周。
治疗组:接受智三针结合五行音乐治疗。智三针治疗选穴主穴:神庭、本神(双侧),辅穴:合谷(双)、太冲(双)、内关(双)。操作方法:上主穴,选用环球牌无菌针灸针(0.3×40mm),直刺25mm,得气后不做手法,留针60分钟。以上辅穴,每日选取一个,器械及操作同上,留针20分钟。针刺治疗连续治疗6天,休息1天,共治疗8周。五行音乐治疗采用聆听方式进行,每天上午下午定时收听音响设备外放音乐1次,每次30min音量控制在60分贝以下,以患者舒适不觉刺耳为度。医生根据患者临床症状,运用中医辨证理论,根据病情累及的脏腑,分别选用角(肝)、徵(心)、宫(脾)、商(肺)、羽(肾)5套治疗音乐进行聆听,五行音乐CD由广东珠江音像出版社出版,收听前向患者讲述音乐所表达的思想感情,连续治疗8周。
角调(肝):欢乐歌、三六、云庆、行街、中花六板、花三六、四合如意。
微调(心):花好月圆、平湖秋月、月牙五更、十面埋伏、金蛇狂舞、寒鸦戏水。
宫调(脾):彩云追月、渔舟唱晚、汉宫秋月、姑苏行、雨打芭蕉。
商调(肺):夕阳箫鼓、昭君怨、蕉窗夜雨、翠湖春晓、柳青娘。
羽调(肾):紫竹调、江河水、到春来、平沙落雁、木棉花开、流水行云。
2.2 观察指标
2.2.1 24项汉密尔顿抑郁量表fHAMD)评定:在未接受抗抑郁治疗前,对所有人组患者进行评定。工作由2名专人负责进行,要求其未参与病人的诊治工作。治疗8周后,对患者进行二次评定。
2.2.2 血浆皮质醇的采集与检测:治疗组和对照组均于治疗前及治疗8周后,空腹抽静脉血5mL置于EDTA抗凝管中,在4℃条件下、13000r/min离心30min,吸取上清液,-70℃条件下保存待测。血浆皮质醇测定采用双抗体夹心放射免疫法,由GC-1200R放射免疫计数仪(中国科学技术大学中佳光电仪器公司)检测,实验步骤严格按照试剂盒(天津九鼎医学生物工程有限公司)说明书操作。2.3统计分析方法本文计量数据用(x±s)表示,进行正态分布检验后,采用SPSSIO.O软件做t检验。
3 结果
3.1 汉密尔顿量表评定比较治疗前两组患者HAMD评定差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性;治疗8周后评分同治疗前比较明显降低,均有显著性差异(PO.05)。结果见表1。
3.2 血浆皮质醇水平检测比较两组患者治疗前血浆皮质醇含量无统计学差异(P>0.05),具有可比性;治疗8周后同治疗前比较血浆皮质醇含量明显下降,具有显著性差异(PO.05)。结果见表2。
篇13
“欢度春节”这些标语在电视机广告上经常可以见到，也正是这些标语为春节添上了欢喜的气氛。
每个人都在春节前上街购物，买件新衣服，新鞋等等。而我也不例外。听说这意味着新的一年能换然一新，来一个好运。我觉得春节也有好的一面，也有坏的一面。当然对于我们来说是好的，有假放，有利是收。而对于清洁工来说，新年可是很辛苦的一段时期，他们在春节期间要打扫的垃圾增了很多。其实我们在开心的同时也不要破坏东西和乱扔东西，我们“不要把自己的快乐建立在别人的痛苦之上”。所以我们不要在公共场所玩的时候，不要乱扔东西，只有这样才能使清洁工人也能做到“欢度春节”。政府也为人们能做到“欢度春节”，特意举办了一个烟花晚会。这个晚会是在十九那晚举行的，那晚有许多人到来，人们甚至要挤到出公路去了。烟花开始放了，首先在我们眼前的是一束束多彩多姿的烟花射上天空，再在空中爆，好象一朵朵美丽的鲜花。接着又有更多在空中爆开时的姿态多样的烟花。人们在观赏的期间还不时传出一阵阵的“哇”声。但是在烟花晚会完了，人们散去之后，牌坊（地方名）却变成了“垃圾场”了，垃圾是随地都是。这是清洁工人可忙个很，他们个个都弯低腰捡垃圾。我当时看到这样的情景想：那些清洁工捡完后一定是很累的了，明天就是大年初一了，也要做得那么累，真是很痛苦！所以我们不要乱扔东西了，使清洁工人也能做到“欢度春节”。
东上村六年级：wyf1992168